亞麻木酚素對高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗的保護作用及其機制研究.pdf

1、目的：探討亞麻木酚素開環(huán)異落葉松樹脂酚二葡萄糖苷（Secoisolariciresinol diglucoside, SDG）對高脂膳食誘導(dǎo)C57BL/6J小鼠胰島素抵抗的保護作用及相關(guān)機制。
　　方法：⑴動物實驗分組：48只C57BL/6J小鼠（雄性，6周齡，體重18-21g）隨機分為4組：低脂飼料組（Low fat diet，LFD，10％脂肪供能）、高脂飼料組（High fat diet， HFD，60%脂肪供能）、SDG組

2、（HFD+SDG0.05%w/w）和SDG對照組（LFD+SDG0.05%w/w）喂養(yǎng)16周以建立胰島素抵抗模型。⑵動物指標檢測：高脂喂養(yǎng)第15周，對各組小鼠進行糖耐量和胰島素耐量試驗。高脂喂養(yǎng)第16周末，處死小鼠并收集血清及組織樣本。測定血清葡萄糖、胰島素、甘油三酯和總膽固醇及炎性因子水平。HE及油紅染色觀察肝臟病理改變；測定肝組織脂質(zhì)水平及氧化應(yīng)激相關(guān)指標；檢測肝臟糖脂代謝相關(guān)基因和胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及調(diào)控通路表達水平。檢測附睪脂肪組織

3、巨噬細胞浸潤與炎癥因子水平，分析巨噬細胞極化狀態(tài)并測定胰島素信號通路變化。⑶細胞實驗：對棕櫚酸刺激的小鼠單核巨噬細胞RAW264.7亞麻木酚素代謝產(chǎn)物腸內(nèi)酯進行干預(yù)，同時加入AMPK激活劑和抑制劑。實時定量PCR法測定RAW264.7細胞極化標志基因及炎性因子基因表達，免疫印跡法檢測AMPK及SIRT1表達變化。探討SDG代謝產(chǎn)物腸內(nèi)酯對高脂環(huán)境下巨噬細胞極化影響及潛在機制。
　　結(jié)果：①亞麻木酚素干預(yù)抑制長期高脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)的肥胖效

4、應(yīng)，降低了肝臟、附睪、腎周脂肪的臟器系數(shù)；降低血糖、血脂、血胰島素水平，改善高脂喂養(yǎng)小鼠糖耐量受損及系統(tǒng)胰島素抵抗；明顯抑制了高脂喂養(yǎng)導(dǎo)致的血清炎癥因子 IL-6、TNF-α和 MCP-1、IL-1β水平增加。②長期高脂喂養(yǎng)導(dǎo)致小鼠嚴重的肝臟脂肪變、脂質(zhì)沉積及氧化應(yīng)激水平升高；亞麻木酚素干預(yù)能夠顯著改善上述變化。③長期高脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)小鼠肝臟脂質(zhì)合成相關(guān)基因如固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c（SREBP-1c）、乙酰輔酶A羧化酶（ACC）、脂肪酸

5、合成酶（FAS）及糖異生關(guān)鍵酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）和葡萄糖-6磷酸酶（G-6-Pase）mRNA表達升高；而脂肪酸氧化相關(guān)基因過氧化物酶體增殖物激活受體α（PPAR-α）、肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-1（CPT-1）、?；o酶A氧化酶（ACOX）表達水平降低。亞麻木酚素干預(yù)部分逆轉(zhuǎn)了上述基因表達水平變化。④高脂喂養(yǎng)小鼠肝臟胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路關(guān)鍵蛋白 Akt、IRS-1磷酸化激活被抑制， p-AMPK及 SIRT1蛋白表達降低。亞

6、麻木酚素干預(yù)部分逆轉(zhuǎn)了上述蛋白表達水平變化。⑤亞麻木酚素干預(yù)減輕長期高脂喂養(yǎng)誘導(dǎo)的附睪脂肪組織炎性細胞尤其是巨噬細胞浸潤；降低M1型巨噬細胞標志基因Cd11c和Nos2 mRNA的表達水平，升高M2型巨噬細胞標志基因Arg1和Mgl2基因表達水平；減少了炎癥因子IL-6、TNF-α和Mcp-1、IL-1β基因表達。⑥亞麻木酚素干預(yù)拮抗高脂膳食對附睪脂肪組織胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路 Akt、IRS-1蛋白磷酸化的抑制，從而改善胰島素抵抗，同時促

7、進附睪脂肪組織AMPK激活及SIRT1蛋白表達。⑦棕櫚酸刺激的RAW264.7細胞M1標志基因及炎癥因子基因表達增加，M2標志基因及p-AMPK及SIRT1蛋白表達降低；腸內(nèi)酯干預(yù)可部分逆轉(zhuǎn)上述變化。
　　結(jié)論：亞麻木酚素SDG干預(yù)對高脂膳食誘導(dǎo)的胰島素抵抗、炎癥和肝臟脂肪變性具有良好的拮抗作用。其作用機制包括改善肝臟糖脂代謝紊亂、增強肝臟胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)并激活 AMPK/SIRT1信號通路。SDG能改善脂肪組織炎癥，增強脂肪組織胰