基于普朗尼克修飾的樹狀聚合物納米給藥系統(tǒng)的構建及其克服腫瘤多藥耐藥的研究.pdf

1、腫瘤多藥耐藥(MDR)是化療失敗的主要原因之一。納米給藥系統(tǒng)因其獨特的性質，為克服MDR提供了一種有效手段。聚酰胺-胺（PAMAM）樹狀大分子具有溶酶體逃逸及細胞核轉運功能，可以將DNA毒性藥物進一步遞送至細胞核內。但PAMAM的高電荷所引起的細胞毒性限制了其應用。普朗尼克是一種具有克服MDR特性的三嵌段共聚物，采用其對PAMAM進行修飾，有利于提高納米給藥系統(tǒng)的安全性和療效。本文首先設計了普朗尼克F127(PF127)修飾的PAMAM

2、聚合物，1H-NMR、FTIR及茚三酮實驗結果均表明PAMAM-PF127成功合成。與PAMAM相比，PAMAM-PF127的zeta電位降低，溶血毒性和細胞毒性減小。以此載體負載阿霉素(DOX)，結果顯示，所制備的DOX/PAMAM-PF127可以增加DOX在MCF-7/ADR細胞內的累積，并將DOX遞送至細胞核內，最終提高MCF-7/ADR細胞的凋亡。
　　本研究主要內容包括：⑴采用生物相容性更好的普朗尼克F68(PF68)對

3、PAMAM進行修飾，考察普朗尼克修飾數目對載體性能的影響。成功制備了PF68修飾數目不同的PAMAM-n1 PF68、PAMAM-n2 PF68及PAMAM-n3 PF68三種聚合物（n表示PF68的接枝數目，分別為31、54及79個）?？疾炝巳NPAMAM-PF68的載藥能力、載藥復合物的粒徑及細胞毒性。結果表明PF68的修飾數目越多，抑制MCF-7/ADR細胞的效果越好。但PF68的過多修飾，亦會降低PAMAM-PF68的載藥能力，

4、并導致載藥復合物粒徑增大，均一性下降。⑵優(yōu)選DOX/PAMAM-n2 PF68進一步考察其克服MDR的機制及體內抗MCF-7/ADR腫瘤的效果。結果顯示，DOX/PAMAM-n2 PF68內吞入胞后，載體的質子海綿效應可以促進其從溶酶體中逃逸。載體進一步作用于線粒體，一方面引起ROS水平的升高、線粒體膜電位的降低，從而促進凋亡的產生;另一方面降低ATP的水平，進而抑制P-gp等藥物外排蛋白的活性。DOX/PAMAM-n2 PF68最終將

5、DOX遞送至細胞核中，并通過調節(jié)耐藥相關基因的表達，如增加TopoⅡα、降低Bcl-2等的表達以進一步促進細胞凋亡。與游離DOX相比，DOX/PAMAM-n2PF68具有更強的腫瘤球滲透能力，能更好地抑制MCF-7/ADR腫瘤球的生長。體內研究表明DOX/PAMAM-n2 PF68能增加藥物在腫瘤部位的累積，顯著抑制MCF-7/ADR腫瘤的生長，并降低DOX的心臟毒性。⑶通過近紅外（NIR）光照控制ROS的產生，進而引起雙硒鍵的斷裂，P

6、PF68脫離GO，藥物暴露而迅速釋放。1H-NMR、FTIR結果表明GO-PPF68成功合成。H2O2處理后，AFM、粒徑及電位結果表明GO-PPF68具有ROS響應性。以此載體共載光敏劑吲哚菁綠(ICG)及化療藥物DOX，構建ICG/DOX/GO-PPF68，以實現可控的化療與光熱治療的協同治療。體外釋放實驗表明DOX從ICG/DOX/GO-PPF68中的釋放具有pH敏感性、溫度依賴性和氧化敏感性。⑷考察ICG/DOX/GO-PPF6

7、8體內外抑制MCF-7/ADR腫瘤的療效。結果表明，NIR激光照射下，ICG/DOX/GO-PPF68對MCF-7/ADR細胞具有較強的細胞毒性。機制研究發(fā)現，NIR激光照射后，ICG/DOX/GO-PPF68可以顯著提高MCF-7/ADR細胞對DOX的攝取量及攝取百分數。入胞后，在NIR激光照射下，載體可以成功從溶酶體中逃逸，引起ROS水平快速升高，進而促使大量DOX迅速釋放，最終DOX達到細胞核。在孵育48 h后，ICG/DOX/G