按摩對大鼠骨骼肌急性鈍挫傷后膜修復(fù)相關(guān)蛋白表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本研究通過觀察大鼠骨骼肌急性鈍挫傷后，按摩對損傷肌細(xì)胞膜修復(fù)相關(guān)蛋白dysferlin、annexin A1及MG53分布和表達(dá)的影響以及對骨骼肌強(qiáng)直性收縮張力的影響，探討骨骼肌損傷后按摩促進(jìn)損傷肌細(xì)胞膜修復(fù)的可能機(jī)制。
　　方法：
　　1、42只成年SD雄性大鼠采用隨機(jī)抽取6只為正常對照組，剩余大鼠成功建立右下肢腓腸肌急性鈍挫傷模型后，隨機(jī)數(shù)字表法分為2組（n=18），包括自然恢復(fù)組和按摩治療組。按摩治療組在損傷后4

2、8h于損傷局部以垂直壓力為5N，頻率為120~150次/min的環(huán)形指揉法進(jìn)行按摩治療，治療時(shí)間10min，每日一次；正常對照組和自然恢復(fù)組不做按摩治療。每組分別于傷后7d、14d、21d三個(gè)時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)選取6只大鼠取材進(jìn)行檢測。HE染色觀察損傷骨骼肌組織病理變化；免疫熒光雙標(biāo)記法標(biāo)記dysferlin和annexin A1，并運(yùn)用激光共聚焦顯微鏡攝片定性觀察其在細(xì)胞內(nèi)分布及表達(dá)變化；采用Western-Blot法檢測dysferlin、

3、annexin A1和MG53蛋白表達(dá)量變化。
　　2、28只成年SD雄性大鼠隨機(jī)抽取4只為正常對照組，剩余大鼠相同方法建模后隨機(jī)抽24只建模成功大鼠隨機(jī)分為2組（n=12），包括自然恢復(fù)組和按摩治療組。相同方法進(jìn)行按摩治療，每組分別于損傷后7d、14d、21d隨機(jī)抽取4只進(jìn)行骨骼肌強(qiáng)直收縮張力檢測。
　　結(jié)果：
　　1、HE染色結(jié)果顯示：正常對照組細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，排列整齊，無炎性細(xì)胞浸潤；損傷后7d，自然恢復(fù)組和按摩治

4、療組細(xì)胞形態(tài)均有明顯變形，細(xì)胞出現(xiàn)崩解、萎縮，細(xì)胞間隙明顯增大，炎性細(xì)胞明顯浸潤，兩組對比無明顯差異；損傷后14d，自然恢復(fù)組細(xì)胞明顯崩解、萎縮，細(xì)胞間隙有明顯結(jié)締組織填充，而按摩治療組細(xì)胞萎縮程度有所減輕，細(xì)胞排列相對緊密，可看到部分新生肌纖維和小血管；損傷后21d，自然恢復(fù)組出現(xiàn)部分新生肌細(xì)胞和小血管，細(xì)胞排列較為紊亂，細(xì)胞之間結(jié)締組織交錯(cuò)明顯，瘢痕組織已經(jīng)形成，而按摩治療組雖有少量結(jié)締組織填充，但細(xì)胞形態(tài)已經(jīng)有明顯恢復(fù)，細(xì)胞排列整

5、齊而緊密，新生血管明顯。
　　2、免疫熒光雙標(biāo)記結(jié)果：用激光共聚焦顯微鏡定性觀察發(fā)現(xiàn)：①正常對照組肌細(xì)胞中兩種蛋白熒光信號主要分布于細(xì)胞膜上及近膜區(qū)域，強(qiáng)度較弱，兩種蛋白熒光信號在細(xì)胞膜上無共表達(dá)現(xiàn)象；②損傷后各組各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞內(nèi)兩種蛋白熒光信號強(qiáng)度較正常對照組都明顯增加，且信號呈彌散性分布。7d時(shí)該現(xiàn)象最為明顯，且自然恢復(fù)組和按摩治療組比較無明顯差異；③隨著時(shí)間點(diǎn)的變化，各組兩種蛋白的熒光強(qiáng)度均減弱，其中在14d和21d時(shí)按摩治療

6、組熒光強(qiáng)度弱于自然恢復(fù)組；④隨著時(shí)間點(diǎn)的變化，兩種熒光信號在細(xì)胞膜上的共表達(dá)也隨之增加，在21d時(shí)按摩治療組共表達(dá)現(xiàn)象較自然恢復(fù)組顯著。
　　3、Western-Blot檢測結(jié)果：①損傷后各組各時(shí)間點(diǎn)三種蛋白表達(dá)量均明顯高于正常對照組；②隨著時(shí)間的延長，各組dysferlin、annexin A1和MG53蛋白表達(dá)量逐漸降低，后一時(shí)間點(diǎn)與前一時(shí)間點(diǎn)比較，差異顯著（P<0.05）；③與自然恢復(fù)組相比，21d時(shí)按摩治療組dysferl

7、in的表達(dá)明顯降低（P<0.05）；14d和21d時(shí)按摩治療組annexin A1的表達(dá)明顯降低（P<0.05）；7d、14d和21d時(shí)按摩治療組MG53的表達(dá)均明顯降低（P<0.05）。
　　4、強(qiáng)直性收縮張力檢測結(jié)果顯示：與正常對照組相比，肌肉損傷后強(qiáng)直性收縮張力明顯升高(P<0.05)。隨著時(shí)間點(diǎn)的變化，自然恢復(fù)組和按摩治療組強(qiáng)直性肌張力逐漸降低；7d和14d按摩治療組強(qiáng)直性肌張力無明顯差異（P＞0.05）；21d時(shí)按摩治療

8、組骨骼肌收縮張力接近正常組，與自然恢復(fù)組相比差異顯著（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　骨骼肌急性頓挫傷后，按摩對膜修復(fù)相關(guān)蛋白的分布和表達(dá)起到了一定的調(diào)控作用，具體情況表現(xiàn)為：①按摩增加了損傷肌細(xì)胞dysferlin、 annexin A1在細(xì)胞膜上的共表達(dá)現(xiàn)象，促進(jìn)了兩種蛋白的相互綁定。②按摩治療后，損傷肌細(xì)胞dysferlin、annexin A1和MG53蛋白表達(dá)量的變化規(guī)律與按摩抑制炎癥反應(yīng)發(fā)展規(guī)律相似，提示按摩促