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文檔簡介
1、目的:研究力竭運動及鈍挫傷對大鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞及Pax7/轉(zhuǎn)錄因子(CBFl)/γ-serectase分泌酶抑制劑(DAPT)的影響,探究骨骼肌損傷的修復(fù)機(jī)制。
方法:實驗選取24只五周齡SD雄性大鼠,隨機(jī)分為4組,每組6只,分別是力竭運動組(Exhaustive Exercise Group,E,3組×6只)和安靜對照組(Control,C,1組×6只),其中力竭運動組各組分別進(jìn)行一次力竭性下坡跑運動達(dá)到力竭狀態(tài),并按照宰殺
2、時間分別標(biāo)注為力竭即刻組(Exhaustive,EO),力竭后24h組(E24)和力竭后48h組(E48)。另外依舊選取18只五周齡SD雄性大鼠隨機(jī)分(3組×6只)作為鈍挫傷組(Contusion Group,D),對各組依次進(jìn)行重物擊打鈍挫,同樣按照宰殺時間分別標(biāo)注為鈍挫傷即刻組(DO),鈍挫傷后24h組(D24)和鈍挫傷后48h組(D48)。在安靜的狀態(tài)下采用20%烏拉坦對安靜對照組,力竭運動組和鈍挫傷組于不同的時間問隔分別進(jìn)行腹腔
3、注射麻醉,宰殺取血制備血清,并取下右側(cè)腓腸肌,將腓腸肌一分為二,一份立即進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)實驗,另一份和血清一起在—80℃冰箱保存,用ELISA法檢測Pax7、CBF1、DAPT的含量變化。另取新生3日齡鼠3只,宰殺后同樣取右側(cè)腓腸肌進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)實驗。
結(jié)果:(1)根據(jù)肌衛(wèi)星細(xì)胞培養(yǎng)實驗結(jié)果顯示:經(jīng)過對骨骼肌進(jìn)行分離處理和純化等一系列體外培養(yǎng)后,體外獲得高純度的肌衛(wèi)星細(xì)胞。觀察在肌衛(wèi)星細(xì)胞培養(yǎng)的初期,除新生鼠組外各組衛(wèi)星細(xì)胞增殖均處
4、于緩慢狀態(tài),從第五天開始大量增殖,到第七天均達(dá)到各自增殖的高峰期,之后增殖速度便開始慢慢下降。各組對比顯示:安靜對照組細(xì)胞增殖最為緩慢且數(shù)量也最少,鈍挫傷組與力竭運動組均增殖迅速且含量較多,但細(xì)研之,兩組之間還是有明顯的差異,即鈍挫傷組的增殖速度和數(shù)量要比力竭運動組高。另外新生鼠組的骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果與各組比較,含量最高且增殖速度最快。培養(yǎng)第二天便可見少量梭形細(xì)胞,之后開始大量增殖,培養(yǎng)第五天可見到有少數(shù)衛(wèi)星細(xì)胞相互融合形成具有中央
5、細(xì)胞核的肌管。
(2) Elisa結(jié)果顯示:力竭運動組和鈍挫傷組各組骨骼肌、血清中Pax7和CBF1的含量與對照組相比均顯著上升,且具有顯著性差異(P<O.05);DAPT在各組骨骼肌、血清中的含量與對照組相比均顯著下降,且具有顯著性差異(P<0.05)。而力竭運動組和鈍挫傷組之間無顯著性差異。
結(jié)論:
(1)對比各組肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖情況發(fā)現(xiàn):安靜對照組無明顯增殖現(xiàn)象,而在新生鼠在未受任何外界刺激的作用下體
6、內(nèi)衛(wèi)星細(xì)胞的增殖含量和速度都是最高的,說明肌衛(wèi)星細(xì)胞在新生鼠體內(nèi)本身就處于激活和分化的狀態(tài)。鈍挫傷組和力竭運動組增殖速度和數(shù)量介于對照組和新生鼠之間,但鈍挫傷對于肌衛(wèi)星細(xì)胞的激活程度更為強(qiáng)烈,說明鈍挫傷對肌肉的損傷程度要大于力竭運動。
(2)力竭運動和鈍挫傷可以促進(jìn)Pax7和CBF1的含量上升,但下調(diào)DAPT的含量。Pax7和CBF1可能在骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞激活及骨骼肌損傷修復(fù)中起著正向調(diào)節(jié)的作用,而DAPT可能起著負(fù)向調(diào)節(jié)作用。
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