葉子花內(nèi)生細(xì)菌的多樣性分析及BS11的抑菌活性的研究.pdf

1、植物內(nèi)生細(xì)菌是定殖在健康植物的各種組織和器官中，與植物之間形成互惠共存、相互制約的和諧聯(lián)合關(guān)系的一類微生物，是植物病害生物防治上一類極具應(yīng)用潛能的資源菌。近幾年，人們探索了大蒜，甘草，紅樹(shù)等多種具有特殊藥用價(jià)值或特殊生態(tài)環(huán)境的植物的內(nèi)生細(xì)菌的多樣性及防病抗病效果，葉子花作為一種有著優(yōu)良的耐高溫、抗旱和抗污染特性的園林觀賞植物，其內(nèi)生細(xì)菌的研究卻鮮見(jiàn)報(bào)道?；谶@點(diǎn)，我們對(duì)本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了設(shè)計(jì)，通過(guò)分離葉子花內(nèi)生細(xì)菌并其多樣性進(jìn)行了分析；以楊樹(shù)

2、腐爛病菌為指示菌利用平板對(duì)峙的方法篩選出具有良好抑菌活性的內(nèi)生菌株BS11，對(duì)BS11菌株進(jìn)行了系統(tǒng)的分類學(xué)鑒定；對(duì)該拮抗菌的抗病、促生等活性進(jìn)行了研究。具體結(jié)果如下：
　　 ⑴用傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)的方法對(duì)葉子花植物不同組織進(jìn)行多次內(nèi)生細(xì)菌的分離，并對(duì)葉子花內(nèi)生細(xì)菌的分離方法進(jìn)行了優(yōu)化。葉子花內(nèi)生細(xì)菌的分離采用改進(jìn)后的分離方法，具體如下：①選材：選擇多年生較為健壯的艷紅葉子花為材料。②取材：在葉子花枝條的中間部位，用無(wú)菌刀切取莖段和

3、葉片，用鐵鏟挖10cm深切取葉子花的根段，摘取成熟的葉子花的葉，無(wú)菌條件下帶回實(shí)驗(yàn)室。③表面消毒：將組織塊用無(wú)菌水表面沖洗，晾干，用十分之一天平分別稱取葉子花的根、莖、葉組織各1g，剪成小塊，然后依次在75％乙醇中浸泡30s、1％的升汞中浸泡2min，最后用無(wú)菌水漂洗3次。
　　 ⑵采用Shannon-Wiener多樣性指數(shù)（H）、豐度（D）、均勻度（J）和CFU4個(gè)指標(biāo)對(duì)分離結(jié)果進(jìn)行葉子花內(nèi)生細(xì)菌的多樣性分析。結(jié)果顯示：不同月

4、份所測(cè)得的CFU值存在差異，6月份和9月份葉子花內(nèi)生細(xì)菌的菌落數(shù)相對(duì)較多，到9月份達(dá)到最大值為1.3333，而3月份和12月份菌落個(gè)數(shù)相對(duì)較少，分別只有0.8和0.5333。從其他三個(gè)指標(biāo)H、D、J來(lái)看，葉子花內(nèi)生細(xì)菌的多樣性、豐度和均勻度在6月份和9月份同3月份和12月份相比均較高；葉子花根中的多樣性指數(shù)（H）的值、豐度指數(shù)（D）值和CFU值均高于其他兩個(gè)組織。
　　 ⑶以楊樹(shù)腐爛病菌為指示菌，用對(duì)峙培養(yǎng)的方法對(duì)分離到的11株

5、葉子花內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)行篩選。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：BS11菌株對(duì)楊樹(shù)腐爛病菌的抑制率達(dá)到了71％。用其他病原真菌以同樣的方法對(duì)BS11菌株的廣譜抑菌性進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)該菌株對(duì)合歡枯萎病菌、楊樹(shù)水泡潰瘍病菌、梔子花炭疽病菌、桑炭疽病菌、蘋果輪紋病菌等的生長(zhǎng)也有很好的抑制效果。
　　 ⑷對(duì)BS11菌株進(jìn)行了系統(tǒng)的分類學(xué)的鑒定。結(jié)果表明：將16SrDNA測(cè)序結(jié)果同其他序列一起，用MEGA4.0軟件的NJ法建樹(shù)，發(fā)現(xiàn)BS11和Burkholderia

6、anthina聚類在一起。BS11菌株在NA培養(yǎng)基上菌落呈淺黃色，表面光滑，中央突起，邊緣整齊；在PDA培養(yǎng)基上菌落呈白色，邊緣波狀，中央平整；革蘭氏染色陰性、桿狀、無(wú)芽孢；生理生化中氧化酶延遲反應(yīng)。BS11的這些特征符合Burkholderia的特證。
　　 ⑸用不同濃度梯度的BS11菌株發(fā)酵液對(duì)葉子花進(jìn)行促生性檢測(cè)。結(jié)果顯示:稀釋10×的菌液處理過(guò)的葉子花根長(zhǎng)同清水對(duì)照的差異達(dá)到顯著水平；未經(jīng)稀釋的發(fā)酵液對(duì)葉子花生根有抑制作