肺炎鏈球菌肽鏈內切酶O(PepO)在宿主固有免疫激活中的作用及機制.pdf

1、目的：肺炎鏈球菌肽鏈內切酶 O(PepO)是一種新近發(fā)現(xiàn)的且保守表達的肺炎鏈球菌毒力蛋白，可幫助細菌黏附侵襲入宿主細胞。有研究顯示一些毒力因子可與宿主固有免疫受體相互作用，激活特異的信號通路，從而誘導宿主的免疫防御反應。那么PepO作為一種毒力因子是否參與了宿主固有免疫反應的激活？其作用機制又是怎樣的呢？探索毒力因子與宿主的相互作用機制可能推動抗菌藥物以及蛋白疫苗的研發(fā)，因此本研究旨在探索PepO在宿主固有免疫激活中的作用及機制。

2、>　　方法：利用原核表達重組蛋白技術制備重組 PepO（rPepO）蛋白溶液。構建氣管內滴注rPepO的小鼠模型，在體內評價rPepO的固有免疫激活效應。采用小鼠腹腔分離的巨噬細胞（PEMs）、小鼠肺上皮細胞株（MLE-12）、人支氣管上皮細胞株（Beas-2B）在體外明確rPepO發(fā)揮免疫激活作用的效應細胞并進一步研究相關的信號通路。利用定量PCR（Q-PCR）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）分析rPepO誘導的細胞因子表達。通過組織

3、切片及蘇木精-伊紅（HE）染色分析肺組織內的炎性改變。利用流式細胞術及瑞士-吉姆薩染色分析支氣管肺泡灌洗液（BALF）中有核細胞的種類。利用小分子抑制劑、蛋白印跡、免疫熒光試驗分析rPepO激活的相關信號通路。
　　結果：證實了PepO在體內外均能誘導小鼠較強的固有免疫反應。氣管內滴注 rPepO后，小鼠肺組織內細胞因子、趨化因子分泌顯著增加且肺內出現(xiàn)廣泛的中性粒細胞浸潤。與野生小鼠相比， Toll樣受體2（TLR2）、Toll樣

4、受體4（TLR4）缺陷小鼠分泌的細胞因子、趨化因子顯著減少（p﹤0.001），中性粒細胞浸潤也顯著減少，但組織損傷更為嚴重。在體外實驗中，rPepO可刺激PEMs分泌白介素6（IL-6）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、CXCL1和CXCL10，該效應依賴于 TLR2、TLR4以及 p38、Akt和 p65的激活。而 rPepO通過MAPKs-NF-κB-PI3K/Akt信號通路促進 MLE-12細胞分泌 IL-6和CXCL1，通過PI3