苦參鎮(zhèn)靜安神有效成分的分離及藥效研究.pdf

1、目的：苦參主要含有生物堿和黃酮兩大類化學(xué)成分。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)苦參的研究比較多，但大多集中在生物堿類成分，苦參黃酮類成分的研究較少。經(jīng)前期研究證實(shí)，苦參堿和苦參醇提物具有鎮(zhèn)靜安神作用，從苦參安神有效部位中分離得到苦參堿和氧化苦參堿等生物堿，以及黃酮類成分和其它類成分。目前關(guān)于苦參黃酮類成分的鎮(zhèn)靜安神作用還未見有報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)以苦參中的黃酮類成分為研究對(duì)象，提取分離苦參鎮(zhèn)靜安神作用有效成分中的黃酮類成分，研究其對(duì)中樞神經(jīng)的作用，進(jìn)一步闡述苦參

2、的鎮(zhèn)靜安神作用。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)采用系統(tǒng)溶劑對(duì)苦參進(jìn)行提取分離;通過翻正反射法初步篩選出苦參中鎮(zhèn)靜安神有效部位;通過對(duì)苦參堿、氧化苦參堿以及黃酮類成分的展開劑和顯色劑的對(duì)比觀察，確立了苦參薄層色譜的檢測(cè)條件，并且對(duì)苦參二氯甲烷鎮(zhèn)靜安神有效部位中的苦參堿、氧化苦參堿和黃酮類成分進(jìn)行了檢測(cè);對(duì)苦參黃酮類成分的HPLC檢測(cè)條件進(jìn)行探索，在流動(dòng)相的選擇上分別考察了甲醇-水、乙腈-0.2％甲酸水溶液，在檢測(cè)波長(zhǎng)分別對(duì)280nm、320nm

3、、360nm進(jìn)行了篩選，并且建立了苦參各萃取部位的黃酮類成分色譜圖;基于高效逆流色譜技術(shù)，對(duì)兩項(xiàng)溶劑系統(tǒng)、流速、轉(zhuǎn)速、實(shí)驗(yàn)溫度分別進(jìn)行考察，優(yōu)化色譜條件，建立操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定可重復(fù)的苦參提取物中黃酮類成分的分離方法，制備黃酮類成分;采用細(xì)胞實(shí)驗(yàn)對(duì)于苦參黃酮類成分的海馬神經(jīng)細(xì)胞作用進(jìn)行研究。
　　結(jié)果：通過系統(tǒng)溶劑對(duì)苦參進(jìn)行萃取得到苦參沉淀物（苦參1號(hào)）、苦參水提液二氯甲烷萃取物（苦參2號(hào)）、苦參水提液乙酸乙酯萃取物（苦參3號(hào)）、苦參

4、水提物（苦參4號(hào)）、苦參醇提液二氯甲烷萃取物（苦參5號(hào)）、苦參醇提液乙酸乙酯萃取物（苦參6號(hào)）、苦參醇提物（苦參7號(hào)）;經(jīng)整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)篩選得到苦參提取物中鎮(zhèn)靜安神有效部位（P＜0.01），即為醇提二氯甲烷萃取部位（苦參5號(hào)）;確立了苦參堿、氧化苦參堿薄層色譜的檢測(cè)條件，展開劑為二氯甲烷-甲醇-濃氨水(5∶0.6∶0.3)，顯色劑為碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉乙醇試液，能顯示持久的橙色斑點(diǎn);確立了黃酮類成分的薄層色譜檢測(cè)條件，展開劑為石油醚-乙

5、酸乙酯-甲醇溶液，顯色劑為三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光(365nm)下能觀察到清晰的斑點(diǎn)，并且檢測(cè)到了苦參二氯甲烷鎮(zhèn)靜安神活性部位中的苦參堿、氧化苦參堿和黃酮類成分;建立了苦參黃酮類成分高效液相色譜方法，通過考察確立了乙腈-0.2％甲酸水為流動(dòng)相，360nm為苦參黃酮類成分的檢測(cè)波長(zhǎng)，并且建立了苦參各萃取部位中黃酮類成分的色譜圖;通過對(duì)苦參黃酮類成分的高速逆流色譜條件的研究，確定流動(dòng)相為石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇∶水(1∶1∶1∶1)，轉(zhuǎn)速：

6、800r/min，流速：3ml/min，溫度：25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)365nm，采用高速逆流色譜分離得到2個(gè)單體成分以及多個(gè)組分，經(jīng)黃酮薄層色譜法檢測(cè)鑒定為苦參黃酮類組分（1-5號(hào)）;通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)苦參黃酮類組分3號(hào)與空白組比較有非常顯著性差異(P＜0.01)，實(shí)驗(yàn)證明苦參黃酮類成分具有抑制海馬神經(jīng)細(xì)胞活性的作用。
　　結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)通過整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)苦參醇提二氯甲烷部位是苦參鎮(zhèn)靜安神有效部位;采用高速逆流色譜技術(shù)對(duì)其鎮(zhèn)靜安神有效部位