復(fù)腎功方對(duì)CRF大鼠腎臟保護(hù)作用的研究.pdf

1、背景：慢性腎功能衰竭(Chronic Renal Failure，CRF)是由先天或后天原因?qū)е碌穆赃M(jìn)行性腎實(shí)質(zhì)損害，致使腎臟功能嚴(yán)重受損的臨床綜合征，主要表現(xiàn)為氮質(zhì)血癥、代謝產(chǎn)物潴留、水電解質(zhì)紊亂、酸堿平衡失調(diào)和全身各系統(tǒng)癥狀，為腎臟疾病持續(xù)發(fā)展的最終歸宿。據(jù)有關(guān)統(tǒng)計(jì)，全球終末期腎功能衰竭靠透析維持生命者多達(dá)360萬人，而中國各種腎臟病人有4000余萬人，每年新發(fā)生的慢性腎功能衰竭患者則有10-30萬人左右。有人預(yù)測，未來10年世界

2、慢性腎功能衰竭患者治療費(fèi)用至少需要1.1萬億美元，如此龐大的費(fèi)用已使政府感到棘手。中醫(yī)藥防治慢性腎功能衰竭療效確切，而復(fù)腎功方是首屆國醫(yī)大師、著名中醫(yī)學(xué)家、全國名老中醫(yī)郭子光教授經(jīng)過60余年來臨床驗(yàn)證總結(jié)出來的、治療慢性腎功能衰竭確有卓著療效的經(jīng)驗(yàn)方。因此，研究復(fù)腎功方對(duì)CRF大鼠腎臟的保護(hù)作用，可為中醫(yī)藥治療CRF尋找新的治療靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，而本課題研究對(duì)于深入挖掘國醫(yī)大師臨床經(jīng)驗(yàn)具有十分重要的臨床實(shí)用價(jià)值、社會(huì)經(jīng)濟(jì)價(jià)值及科學(xué)研究價(jià)

3、值。
　　目的：為了研究復(fù)腎功方對(duì)慢性腎功能衰竭大鼠腎臟的保護(hù)作用，本課題檢測了慢性腎功能衰竭大鼠腎組織α-SMA、E-cadherin及Nephrin等蛋白的表達(dá)，分別從抗腎纖維化、保護(hù)腎小管及足細(xì)胞等角度，探討復(fù)腎功方保護(hù)慢性腎功能衰竭大鼠腎臟的作用機(jī)制，以期為開發(fā)一個(gè)安全有效的治療CRF的中成藥提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：取雄性SD大鼠55只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為5組：正常組，模型組，復(fù)腎功方低、中、高劑量組，每組

4、11只。正常組常規(guī)飼養(yǎng)，其余各組大鼠食用含0.5％腺嘌呤飼料，每只大鼠按1天食入20g料塊計(jì)算，連續(xù)21d。造模21天后，隨機(jī)抽取各組大鼠1只，摘取眼球采血，分離血清，檢測Scr和BUN等指標(biāo)以驗(yàn)證造模是否成功。造模成功后，所有大鼠均停用含0.5％腺嘌呤的飼料，改用常規(guī)飼料。從造模成功后第1天起，正常組和模型組給予NS20mL?kg-1體重灌胃，復(fù)腎功方低、中、高劑量組分別以4、8、16 g生藥?kg-1體重灌胃復(fù)腎功方煎劑，每日1次，

5、連續(xù)30 d。
　　治療30d后，末次給藥后禁食不禁水12 h，按20%烏拉坦5 mL?kg-1進(jìn)行麻醉，摘取眼球采血3-5 ml，靜置1-2 h，4000 r?min-1離心10 min，分離血清，取上清液，低溫4℃保存待檢測用。頸椎脫臼處死大鼠，打開腹腔取出腎臟，并做檢測前組織的相關(guān)處理。HE染色和Masson染色檢測腎組織形態(tài)學(xué)改變和腎間質(zhì)纖維化程度，免疫組化及 western blotting檢測α-SMA及E-cadhe

6、rin蛋白的表達(dá)，免疫熒光及RT-PCR檢測Nephrin mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：與正常組比較，模型組大鼠腎組織α-SMA表達(dá)明顯上調(diào)（P＜0.05），E-cadherin及Nephrin表達(dá)明顯下調(diào)（P＜0.05）；與模型組比較，復(fù)腎功方各劑量組腎組織α-SMA表達(dá)明顯下調(diào)（P＜0.05）， E-cadherin及Nephrin蛋白表達(dá)則顯著上調(diào)（P＜0.05）。光鏡下正常組大鼠腎小管和腎小球結(jié)構(gòu)正常，未見明顯組織學(xué)改變；

7、模型組大鼠腎小球變形萎縮，球囊閉塞，腎小管萎縮，管腔明顯擴(kuò)大，間質(zhì)纖維化明顯，間質(zhì)炎性細(xì)胞彌漫浸潤。經(jīng)復(fù)腎功方治療后，復(fù)腎功方低劑量組大鼠腎小球、腎小管萎縮及間質(zhì)纖維化有所減輕，間質(zhì)炎性細(xì)胞彌漫浸潤；復(fù)腎功方中劑量組大鼠腎小球、腎小管萎縮及間質(zhì)纖維化明顯減輕，間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤減輕；復(fù)腎功方高劑量組大鼠腎臟病理改變顯著減輕，間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤明顯減輕。
　　結(jié)論：復(fù)腎功方對(duì)CRF大鼠腎臟的保護(hù)作用，可能通過復(fù)腎功方抗腎纖維化、保護(hù)腎小管