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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
構(gòu)建固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白裂解激活蛋白(SREBP cleavage activating protein,SCAP)腺病毒,探討其對(duì)ATDC5軟骨干細(xì)胞增殖及凋亡的影響。為進(jìn)一步研究SCAP基因的生物學(xué)功能奠定基礎(chǔ),也為探討SCAP介導(dǎo)的脂代謝與骨關(guān)節(jié)炎的關(guān)系提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
方法:
應(yīng)用 AdEasyTM腺病毒載體系統(tǒng),構(gòu)建并包裝 Ad-SCAP和靶向SCAP的siRNA腺病毒siS
2、CAP1和siSCAP2,RT-PCR和Western blot法檢測(cè)其在 ATDC5細(xì)胞中的表達(dá)。FCM檢測(cè) SCAP重組腺病毒對(duì)ATDC5細(xì)胞增殖和凋亡的影響; Western blot檢測(cè)SCAP重組腺病毒感染ATDC5細(xì)胞時(shí),凋亡相關(guān)蛋白Cleaved Caspase-3, p-JNK的表達(dá)。
結(jié)果:
成功構(gòu)建重組腺病毒 Ad-SCAP和 Ad-siSCAP;Ad-SCAP處理組ATDC5細(xì)胞凋亡率明顯增加(
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