Ad-XBP1S腺病毒載體的構(gòu)建及對(duì)軟骨細(xì)胞分化的研究.pdf

1、目的：構(gòu)建重組人剪接型X盒結(jié)合蛋白1(X-box binding protein1spliced，XBP1S)腺病毒載體，并探討其對(duì)軟骨細(xì)胞分化的影響。
　　 方法：應(yīng)用AdEasyTM載體系統(tǒng)，構(gòu)建并包裝Ad-XBP1S腺病毒顆粒。測(cè)定病毒滴度用于后續(xù)試驗(yàn)。構(gòu)建和包裝靶向XBP1S的siRNA重組腺病毒顆粒（詳見(jiàn)第一、二部分）。微團(tuán)培養(yǎng)C3H10T1/2、BMSC及ATDC5細(xì)胞，在BMP1誘導(dǎo)不同時(shí)間點(diǎn)分別感染Ad-XBP1

2、S、siXBP1S、GFP，檢測(cè)軟骨分化相關(guān)基因的表達(dá);檢測(cè)XBP1S是否與Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2(Runt-related transcription factor-2，Runx2)結(jié)合形成復(fù)合物，進(jìn)而探討XBP1S調(diào)控軟骨細(xì)胞分化與肥大的分子機(jī)制。
　　 結(jié)果：成功構(gòu)建重組腺病毒Ad-XBP1S與Ad-XBP1S siRNA;體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)均證明XBP1S在軟骨細(xì)胞分化過(guò)程中的表達(dá);通過(guò)對(duì)軟骨細(xì)胞分化相關(guān)標(biāo)志基因的檢測(cè)，證實(shí)X