三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)在鹽度脅迫下滲透調(diào)節(jié)和免疫響應(yīng)機(jī)制的初步研究.pdf

1、鹽度是影響甲殼動(dòng)物健康生長(zhǎng)發(fā)育的重要環(huán)境因子，它直接影響甲殼動(dòng)物的存活、生長(zhǎng)和滲透調(diào)節(jié)等其他重要生理功能。本文通過(guò)研究鹽度脅迫對(duì)三疣梭子蟹相關(guān)滲透調(diào)節(jié)指標(biāo)、免疫信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路因子和免疫防御因子的影響，初步探討了三疣梭子蟹在鹽度脅迫下的滲透生理適應(yīng)性和免疫響應(yīng)機(jī)制，主要包括內(nèi)容有三個(gè)方面:(1)鹽度脅迫對(duì)三疣梭子蟹滲透生理適應(yīng)性的影響;(2)鹽度脅迫對(duì)三疣梭子蟹生物胺-免疫信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響;(3)鹽度脅迫對(duì)三疣梭子蟹免疫防御因子的影響。主

2、要研究結(jié)果如下:
　　1.鹽度脅迫對(duì)三疣梭子蟹滲透生理適應(yīng)性的影響
　　本實(shí)驗(yàn)梯度設(shè)置為:31 ppt（對(duì)照組:自然海水）、26 ppt、21 ppt處理組，取樣時(shí)間點(diǎn)為0、3、6、12、24、71和144 h，分別取三疣梭子蟹的血淋巴和鰓絲組織，測(cè)定血淋巴滲透壓、血藍(lán)蛋白含量、鰓絲離子轉(zhuǎn)運(yùn)酶活力和生物胺含量等指標(biāo)。結(jié)果顯示:鹽度變化對(duì)三疣梭子蟹血淋巴滲透壓、鰓絲離子轉(zhuǎn)運(yùn)酶活力和生物胺含量影響顯著(P＜0.05），而對(duì)照組無(wú)

3、明顯變化。各處理組中血淋巴滲透壓在實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)呈峰值變化，至24 h滲透壓達(dá)到最小值，72 h后保持穩(wěn)定，但明顯低于對(duì)照組水平。各處理組中鰓絲Na+-K+-ATPase活力逐漸上升，至12h達(dá)到最大值，72 h后保持穩(wěn)定，V-ATPase和HCO3--ATPase活力在實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)變化不顯著。各處理組中鰓絲多巴胺、去甲腎上腺素、5-羥色胺含量在實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)均呈峰值變化(P＜0.05），多巴胺、去甲腎上腺素和5-羥色胺含量均于12h時(shí)達(dá)到最大值

4、，多巴胺在24 h后趨于穩(wěn)定，而去甲腎上腺素和5-羥色胺在72 h后達(dá)到穩(wěn)定，穩(wěn)定后與對(duì)照組無(wú)顯著性差異。結(jié)果表明，在鹽度適應(yīng)過(guò)程中，Na+-K+-ATPase起主導(dǎo)作用。此外，生物胺作為一種神經(jīng)內(nèi)分泌因子，在鹽度變化后短時(shí)間內(nèi)發(fā)生變化，從而激活鰓絲Na+-K+-ATPase活力，迅速調(diào)節(jié)體內(nèi)外離子濃度和血淋巴滲透壓以達(dá)到滲透平衡。
　　2.鹽度脅迫對(duì)三疣梭子蟹生物胺-免疫信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響
　　本實(shí)驗(yàn)梯度設(shè)置為:31 pp

5、t（對(duì)照組:自然海水）、26 ppt、21 ppt處理組，取樣時(shí)間點(diǎn)0、3、6、12、24、72和144 h，抽取三疣梭子蟹的血淋巴，測(cè)定血漿生物胺含量、血細(xì)胞生物胺受體mRNA的表達(dá)、cAMP、PLC、PKA和PKC含量等指標(biāo)。結(jié)果表明:鹽度脅迫對(duì)三疣梭子蟹血漿生物胺含量、血細(xì)胞生物胺受體mRNA的表達(dá)、cAMP含量、PLC、PKA和PKC活性影響顯著（P＜0.05），而對(duì)照組無(wú)明顯差異。各處理組中DA、5-HT含量變化顯著（P＜0.

6、05），NE含量變化不明顯，對(duì)照組無(wú)明顯變化。各處理組中DA和5-HT含量在實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)呈峰值變化，至12h達(dá)到最大值，之后恢復(fù)至對(duì)照組水平并保持穩(wěn)定，NE含量在實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)沒(méi)有明顯變化(P＜0.05)。生物胺受體（DA和5-HT受體）mRNA表達(dá)在實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)呈峰值變化，至12h達(dá)到最大值，在24 h后恢復(fù)對(duì)照組水平并保持穩(wěn)定。各處理組中cAMP含量、PKA、PLC及PKC活性在實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)呈峰值變化，至12h達(dá)到最大值，cAMP含量和PKA

7、活力至72h后恢復(fù)至對(duì)照組水平并保持穩(wěn)定，而PKC和PLC活力至24 h恢復(fù)至對(duì)照組水平并保持穩(wěn)定。由此說(shuō)明，血淋巴生物胺含量的變化與免疫指標(biāo)的變化趨勢(shì)基本一致，可作為一種對(duì)外界環(huán)境變化的適應(yīng)，同時(shí)生物胺對(duì)機(jī)體的免疫防御具有重要的調(diào)節(jié)作用，調(diào)節(jié)路徑可能是cAMP→PKA→非特異性免疫因子或PLC→PKC→非特異性免疫因子。
　　3.鹽度脅迫對(duì)三疣梭子蟹免疫防御指標(biāo)的影響
　　本實(shí)驗(yàn)梯度設(shè)置為:31 ppt（對(duì)照組:自然海水）

8、、26 ppt、21 ppt處理組，取樣時(shí)間點(diǎn)有0、3、6、12、24、72和144 h，抽取三疣梭子蟹血淋巴，測(cè)定血細(xì)胞數(shù)量、血細(xì)胞酚氧化酶原活性、血漿酚氧化酶活性、血細(xì)胞吞噬率和血漿抗菌、溶菌活力等指標(biāo)。結(jié)果表明，鹽度脅迫對(duì)三疣梭子蟹血細(xì)胞數(shù)量、血細(xì)胞酚氧化酶原活性、血漿酚氧化酶活性、血細(xì)胞吞噬率和血漿抗菌、溶菌活力等指標(biāo)影響顯著（P＜0.05）。各處理組中血細(xì)胞數(shù)量在實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)呈峰值變化，至12h總血細(xì)胞數(shù)量達(dá)到最小值，24 h后

9、保持穩(wěn)定，但明顯低于對(duì)照組水平。各處理組酚氧化酶原及酚氧化酶活性在實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)呈峰值變化，至12h酚氧化酶原活性達(dá)到最小值，而酚氧化酶活性達(dá)到最大值，72 h后恢復(fù)對(duì)照組水平并保持穩(wěn)定。各處理組吞噬、抗菌、溶菌活力在24 h內(nèi)呈峰值變化，至12h達(dá)到最小值，72 h后恢復(fù)對(duì)照組水平。由此說(shuō)明，三疣梭子蟹對(duì)鹽度脅迫產(chǎn)生了較強(qiáng)的應(yīng)激反應(yīng)，在低鹽度下非特異性免疫因子活性受到抑制;同時(shí)，三疣梭子蟹對(duì)鹽度變化具有一定的免疫調(diào)節(jié)能力，且有明顯的時(shí)間規(guī)