從HHcy角度探討AD的發(fā)病機(jī)理及補(bǔ)腦Ⅰ號(hào)干預(yù)作用的臨床及實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察補(bǔ)腦Ⅰ號(hào)對(duì)心腎虧虛、痰濁阻竅型AD及AD前期并Hcy≥14μmol/l患者的臨床療效及安全性分析。并建立體外高同型半胱氨酸腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞受損模型，模擬腦血管高同型半胱氨酸血癥，觀察補(bǔ)腦Ⅰ號(hào)含藥血清對(duì)體外高同型半胱氨酸腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞受損模型的作用。從HHcy角度探討AD的可能發(fā)病機(jī)理及補(bǔ)腦Ⅰ號(hào)干預(yù)作用。
　　方法：
　　臨床部分:收集該院2013年12月-2016年2月住院或門診心腎虧虛、痰濁阻竅型AD及AD前期

2、并Hcy≥14μmol/l患者，篩選出符合標(biāo)準(zhǔn)的60例隨機(jī)分為治療組、對(duì)照組，治療組給予補(bǔ)腦Ⅰ號(hào)湯劑+常規(guī)西藥（多奈哌齊+葉酸片+維生素B6+維生素B12）治療，對(duì)照組給予常規(guī)西藥治療，療程3個(gè)月。使用日常生活能力量表(ADL)、MMSE量表及中醫(yī)癥狀評(píng)分表評(píng)定療效，并檢測(cè)受試者血液中NO、ET-1、Hcy、ICAM-1等因子含量，治療前后分別進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)。
　　實(shí)驗(yàn)部分:出生10天齡昆明種小鼠分離培養(yǎng)獲得原代腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞;

3、100只2個(gè)月齡昆明小鼠，進(jìn)行補(bǔ)腦Ⅰ號(hào)灌胃1次/天，連續(xù)7天后，采取全血，離心，過濾，滅活，獲取正常血清和補(bǔ)腦Ⅰ號(hào)含藥血清。通過MTT法篩選出Hcy、補(bǔ)腦Ⅰ號(hào)含藥血清最佳干預(yù)濃度和最佳作用時(shí)間，進(jìn)行體外高同型半胱氨酸造模及不同因素干預(yù)。正式實(shí)驗(yàn)分為4組:正常組、模型組、模型組+正常血清組、模型組+補(bǔ)腦Ⅰ號(hào)含藥血清組。使用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)ICAM-1、bcl-2蛋白表達(dá)量，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)ICAM-1、NFκBp65、Bax等基

4、因的相對(duì)表達(dá)量，ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清中NO、ET-1分泌水平。
　　結(jié)果：
　　臨床部分:治療前后比較:兩組ADL評(píng)分、Hcy濃度均降低，MMSE評(píng)分升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;治療組中醫(yī)癥狀評(píng)分、ET-1、ICAM-1含量降低，NO升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，對(duì)照組差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治療后，與對(duì)照組比較，中醫(yī)癥狀評(píng)分、ADL評(píng)分、ET-1、ICAM-1、Hcy降低，MMSE評(píng)分、NO升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;治療組、對(duì)照

5、組MMSE評(píng)分有效率分別為89.6％、75.8％，治療組、對(duì)照組中醫(yī)癥候評(píng)分有效率分別為82.75％、65.5％。安全性分析:治療前后治療組和對(duì)照組均無不良反應(yīng)。
　　實(shí)驗(yàn)部分:成功獲得純度較高的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞;10mol/L的Hcy干預(yù)24h具有明顯的細(xì)胞毒性作用，可抑制腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)引起細(xì)胞損傷，成功模擬體外高同型半胱氨酸腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞受損的模型。通過MTT法篩選補(bǔ)腦Ⅰ號(hào)含藥血清最佳干預(yù)濃度為10％（體積分?jǐn)?shù)）及最

6、佳時(shí)間作用點(diǎn)為72小時(shí)。造模及干預(yù)處理后，與模型組比較模型組+補(bǔ)腦Ⅰ號(hào)含藥血清組ICAM-1蛋白表達(dá)量、ICAM-1、NFκBp65、Bax基因相對(duì)表達(dá)量，細(xì)胞上清ET-1分泌水平下降，bcl-2蛋白表達(dá)量、細(xì)胞上清NO分泌水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;正常血清+模型組的變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;正常組ICAM-1蛋白表達(dá)量，ICAM-1、NFκBp65、Bax基因相對(duì)表達(dá)量，細(xì)胞上清ET-1分泌水平下降，bcl-2蛋白表達(dá)量、細(xì)胞上清NO分泌水

7、平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.補(bǔ)腦Ⅰ號(hào)能夠改善AD或AD前期患者的認(rèn)知功能障礙，減輕患者臨床癥狀及提高生活質(zhì)量，安全性好，值得更深層次的研究和臨床應(yīng)用;
　　2.補(bǔ)腦Ⅰ號(hào)能降低Hcy水平，改善AD癥狀，對(duì)AD發(fā)生、發(fā)展具有保護(hù)作用，為臨床老年性癡呆藥物治療的開發(fā)提供依據(jù);
　　3.補(bǔ)腦Ⅰ號(hào)對(duì)高同型半胱氨酸損傷的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞具有保護(hù)作用，其保護(hù)機(jī)制可能與，當(dāng)機(jī)體受到高同型半胱氨酸損傷時(shí)，補(bǔ)腦Ⅰ