重組人促紅細(xì)胞生成素對(duì)新生3日齡大鼠和早產(chǎn)兒腦損傷的保護(hù)作用及其對(duì)腦干聽(tīng)覺(jué)誘發(fā)電位的影響.pdf

1、研究背景：
　　隨著圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，更多的低胎齡、低體重新生兒得以救治。早產(chǎn)兒由于腦組織解剖結(jié)構(gòu)的特殊性以及各系統(tǒng)功能不成熟，易發(fā)生腦白質(zhì)損傷(WhiteMatterDamage，WMD)，腦室周?chē)踪|(zhì)軟化(Periventricularleukomalacia，PVL)是其最嚴(yán)重的結(jié)局。早產(chǎn)兒WMD可導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)功能障礙、認(rèn)知功能障礙、視聽(tīng)功能障礙、語(yǔ)言功能障礙、行為和心理問(wèn)題等神經(jīng)系統(tǒng)不良預(yù)后，是引起早產(chǎn)兒傷殘的重要原因，嚴(yán)重影響

2、患兒生存質(zhì)量。
　　促紅細(xì)胞生成素（Erythropoietin，EPO）是一種由腎臟和肝臟分泌的激素樣物質(zhì)，可刺激骨髓中的造血干細(xì)胞的增殖與分化。近年研究發(fā)現(xiàn)，EPO不僅可促進(jìn)造血，而且具有保護(hù)/修復(fù)腦損傷的功能。本研究探索了重組人促紅細(xì)胞生成素（RecombinantHumanErythropoietin，rhEPO）對(duì)新生3日齡大鼠和早產(chǎn)兒腦損傷的保護(hù)作用及其對(duì)腦干誘發(fā)電位的影響。
　　第一部分動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
　　目的

3、：
　　1．研究探討新生3日齡大鼠缺氧缺血性腦損傷（hypoxic-ischemicbraindamage,HIBD）動(dòng)物模型中腦灰質(zhì)的損傷情況。
　　2．研究探討rhEPO對(duì)腦組織的保護(hù)作用、腦干誘發(fā)電位(brainstemauditoryevokedpotentials,BAEP)的影響及其可能作用機(jī)制。
　　3．研究比較預(yù)防性應(yīng)用rhEPO和腦損傷后應(yīng)用rhEPO對(duì)腦組織保護(hù)作用的差異。
　　方法：

4、　　隨機(jī)將120只新生3日齡大鼠分為4組，每組30只，分組后均予以測(cè)量體重并做不同處理：①假手術(shù)組：僅分離左側(cè)頸總動(dòng)脈，不做其它處理；②EPO組：分離并結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈，然后混合氣缺氧箱中缺氧2.5小時(shí)，缺氧完成后立即予以腹腔注射rhEPO治療（5000IU/Kg）；③預(yù)EPO組：造模前1h給予rhEPO腹腔注射（5000IU/Kg），1h后予以分離并結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈、缺氧；④造模組：分離并結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈，置于混合氣缺氧箱中缺氧2.5

5、小時(shí)，缺氧完成后立即予以腹腔注射等量生理鹽水治療。
　　四組大鼠生后5d、7d、11d、21d時(shí)測(cè)量體重、腦重量并計(jì)算左腦質(zhì)量損傷百分比、觀察各組大鼠腦組織大體形態(tài)改變、組織蘇木素-伊紅染色病理學(xué)改變以及神經(jīng)元特異性烯醇化酶(Neuron-SpecificEnolase,NSE)免疫組化情況。于四組大鼠生后21d、28d、35d日齡時(shí)行BAEP檢查并予以記錄BAEP中Ⅰ-Ⅴ波各波形波峰潛伏期(peaklatency,PL)和Ⅰ波-

6、-Ⅲ波、Ⅲ波--Ⅴ波、Ⅰ波--Ⅴ波波峰間潛伏期(inter一peaklatency,IPL)。
　　結(jié)果：
　　1.4組大鼠術(shù)前體重相近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。生后5天時(shí)造模組體重明顯低于假手術(shù)組和預(yù)EPO組（P<0.05）；生后11天時(shí)造模組體重明顯低于其它三組（P<0.05）；生后21天時(shí)造模組體重明顯低于其它三組（P<0.05）；生后21天時(shí)EPO組體重明顯低于預(yù)EPO組（P<0.05）。
　　2.生后5

7、天時(shí)造模組大鼠腦重高于假手術(shù)組（P<0.05）。生后11天時(shí)造模組大鼠腦重低于其它三組大鼠腦重（P<0.05）；生后21天時(shí)造模組大鼠腦重低于其它三組大鼠腦重（P<0.05）。
　　3.生后5天時(shí)造模組腦質(zhì)量損傷％明顯大于其它三組（P<0.05）；生后11天時(shí)造模組腦質(zhì)量損傷%明顯大于其它三組（P<0.05）；生后11天時(shí)EPO組腦質(zhì)量損傷%大于預(yù)EPO組（P<0.05）；生后21天時(shí)造模組腦質(zhì)量損傷%明顯大于其它三組（P<0.0

8、5）。
　　4.四組大鼠術(shù)前均未見(jiàn)明顯行為學(xué)異常。造模后多數(shù)大鼠會(huì)發(fā)生呼吸急促、翻身不能、四肢抖動(dòng)、吃奶欠佳、嗜睡、易激惹等行為改變。
　　5.生后11天時(shí)左腦皮層組織切片：假手術(shù)組：組織形態(tài)正常。造模組：細(xì)胞萎縮，核破碎，排列紊亂,出現(xiàn)海綿狀、條索狀空洞。生后21天時(shí)造模組大鼠左腦萎縮更加明顯。術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)EPO組和預(yù)EPO組腦損傷情況均較造模組減輕，EPO治療組和預(yù)EPO組兩組腦損傷情況無(wú)明顯差異。
　　6.生后

9、5天（造模后48h)造模組細(xì)胞間隙可見(jiàn)部分NSE深棕黃色陽(yáng)性表達(dá);生后7天（術(shù)后96h）細(xì)胞間隙可見(jiàn)大量深棕黃色陽(yáng)性表達(dá);生后11天（術(shù)后8天）細(xì)胞間隙棕黃色表達(dá)明顯減少。EPO組和預(yù)EPO組術(shù)后不同時(shí)間細(xì)胞間隙深棕黃色陽(yáng)性表達(dá)均較造模組術(shù)后同時(shí)間點(diǎn)表達(dá)減少，陽(yáng)性表達(dá)主要在細(xì)胞內(nèi)。EPO治療組和預(yù)EPO組術(shù)后不同時(shí)間細(xì)胞內(nèi)外棕黃色表達(dá)無(wú)明顯差異。
　　7.生后21日齡時(shí)，造模組Ⅰ-Ⅴ波各波PL均長(zhǎng)于假手術(shù)組（P<0.05）；造模組

10、Ⅰ-Ⅴ波各波PL均長(zhǎng)于預(yù)EPO組（P<0.05）；造模組Ⅳ波、Ⅴ波PL長(zhǎng)于EPO組（P<0.05）；EPO組Ⅱ波PL長(zhǎng)于預(yù)EPO組（P<0.05）。
　　8.生后28日齡時(shí)，造模組Ⅰ-Ⅴ波各波PL均長(zhǎng)于假手術(shù)組（P<0.05）；造模組Ⅰ-Ⅴ波各波PL均長(zhǎng)于預(yù)EPO組（P<0.05）；造模組Ⅱ-Ⅴ波各波PL均長(zhǎng)于EPO組對(duì)應(yīng)波PL（P<0.05）；EPO組Ⅰ波、Ⅲ波PL長(zhǎng)于預(yù)EPO組對(duì)應(yīng)波PL（P<0.05）。
　　9.生后3

11、5日齡時(shí)，造模組Ⅰ-Ⅴ波各波PL均長(zhǎng)于假手術(shù)組（P<0.05）；造模組Ⅱ-Ⅴ波各波PL均長(zhǎng)于預(yù)EPO組和EPO組（P<0.05）；EPO組Ⅲ-Ⅴ波各波PL長(zhǎng)于預(yù)EPO組對(duì)應(yīng)波PL（P<0.05）。
　　10.生后21日齡時(shí)，造模組Ⅰ--Ⅲ波、Ⅰ--Ⅴ波IPL長(zhǎng)于假手術(shù)組（P<0.05）；造模組Ⅰ--Ⅲ波、Ⅰ--Ⅴ波IPL長(zhǎng)于預(yù)EPO組（P<0.05）。
　　11.生后28日齡時(shí)，造模組Ⅰ--Ⅲ波、Ⅰ--Ⅴ波IPL長(zhǎng)于假手術(shù)組

12、（P<0.05）；造模組Ⅰ--Ⅲ波、Ⅰ--Ⅴ波IPL長(zhǎng)于預(yù)EPO組和EPO組（P<0.05）。
　　12.生后35日齡時(shí)，造模組Ⅰ--Ⅲ波、Ⅲ--Ⅴ波、Ⅰ--Ⅴ波IPL均長(zhǎng)于假手術(shù)組（P<0.05）；造模組Ⅰ--Ⅲ波、Ⅲ--Ⅴ波、Ⅰ--Ⅴ波各IPL均長(zhǎng)于預(yù)EPO組（P<0.05）；造模組Ⅰ--Ⅲ波、Ⅰ--Ⅴ波IPL均長(zhǎng)于EPO組（P<0.05）；EPO組Ⅰ--Ⅴ波IPL長(zhǎng)于預(yù)EPO組對(duì)應(yīng)波IPL（P<0.05）。
　　結(jié)論：

13、
　　1.新生3日齡大鼠HIBD模型腦損傷不但累及白質(zhì)，腦灰質(zhì)同樣受到損傷。
　　2.rhEPO對(duì)新生3日齡HIBD大鼠具有一定的神經(jīng)系統(tǒng)保護(hù)作用。
　　3.預(yù)防性應(yīng)用rhEPO比損傷后應(yīng)用rhEPO對(duì)新生3日齡HIBD大鼠具有更大的神經(jīng)系統(tǒng)保護(hù)作用。
　　第二部分臨床研究
　　目的：
　　探討重組人促紅細(xì)胞生成素（RecombinantHumanErythropoietin，rhEPO）對(duì)早產(chǎn)兒腦組

14、織的保護(hù)作用及其對(duì)早產(chǎn)兒糾正年齡1歲內(nèi)智能發(fā)育的影響。
　　方法：
　　選擇2013年12月—2014年12月我院珠江新城院區(qū)新生兒病房收治的出生胎齡＜34周早產(chǎn)兒中患兒家屬同意住院期間使用rhEPO治療（生后7天開(kāi)始，250IU/kg，皮下注射，每周3次）的治愈出院早產(chǎn)兒為EPO組；選擇同期在本院珠江新城院區(qū)出生的出生胎齡＜34周早產(chǎn)兒中患兒家屬不同意住院期間使用rhEPO治療的治愈出院早產(chǎn)兒為對(duì)照組。比較兩組患兒治療效果

15、及糾正年齡3-6月、9-12月時(shí)的智能發(fā)育情況。
　　結(jié)果：
　　EPO組和對(duì)照組分別納入患兒101例和93例。兩組患兒出生胎齡、出生體重、性別構(gòu)成、分娩方式、Apgar評(píng)分、胎膜早破、妊娠期高血壓綜合癥、妊娠期糖尿病、母孕期感染、產(chǎn)前激素使用情況差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），兩組患兒具有可比性。兩組患兒住院期間均未見(jiàn)紅細(xì)胞增多癥、嗜中性粒細(xì)胞減少、血小板增加、高血壓等rhEPO可能導(dǎo)致的副作用。兩組患兒新生兒壞死性小

16、腸結(jié)腸炎、新生兒敗血癥、腦室周?chē)踪|(zhì)軟化、動(dòng)脈導(dǎo)管未閉、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變發(fā)生率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。EPO組支氣管肺發(fā)育不良、顱內(nèi)出血、腦干聽(tīng)覺(jué)誘發(fā)電位異常發(fā)生率明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。對(duì)EPO組42例和對(duì)照組37例患兒腦干誘發(fā)電位檢查報(bào)告進(jìn)行分析：對(duì)照組左耳Ⅲ波、Ⅴ波PL明顯長(zhǎng)于EPO組左耳對(duì)應(yīng)波PL（P<0.05）。對(duì)照組右耳Ⅰ波、Ⅲ波、Ⅴ波PL明顯長(zhǎng)于EPO組右耳對(duì)應(yīng)波PL（P<0.05）。對(duì)

17、照組左耳Ⅰ--Ⅲ波、Ⅰ--Ⅴ波IPL明顯長(zhǎng)于EPO組左耳對(duì)應(yīng)波IPL（P<0.05）。早產(chǎn)兒糾正年齡3-6個(gè)月時(shí)參加Gesell測(cè)試的早產(chǎn)兒為：EPO組80例，對(duì)照組71例；早產(chǎn)兒糾正年齡9-12個(gè)月時(shí)參加Gesell測(cè)試的早產(chǎn)兒為：EPO組72例，對(duì)照組59例。糾正年齡3-6月時(shí)EPO組大運(yùn)動(dòng)、精細(xì)運(yùn)動(dòng)、語(yǔ)言、個(gè)人社交發(fā)育商均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。糾正年齡9-12月時(shí)EPO組大運(yùn)動(dòng)、語(yǔ)言、適應(yīng)性、個(gè)人社交發(fā)育商

18、均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.出生胎齡＜34周早產(chǎn)兒生后7天開(kāi)始使用rhEPO治療（250IU/Kg，每周三次）對(duì)早產(chǎn)兒神經(jīng)系統(tǒng)具有一定的保護(hù)作用。
　　2.出生胎齡＜34周早產(chǎn)兒生后7天開(kāi)始使用rhEPO治療（250IU/Kg，每周三次）未增加rhEPO可能的副作用。
　　3.出生胎齡＜34周早產(chǎn)兒生后7天開(kāi)始使用rhEPO治療（250IU/Kg，每周三次）有利于促進(jìn)早產(chǎn)