2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩128頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領

文檔簡介

1、目的:
  腸癌是全世界最常見的腫瘤之一。抑癌基因腺瘤性息肉病基因(adenomatous polyposis coli gene,Apc)突變是腸癌形成多步驟過程中的早期事件。高脂飲食在改變腸道菌群的同時增加腸腔內(nèi)脫氧膽酸(deoxycholic acid,DCA)的含量,而DCA水平持續(xù)升高與腸癌發(fā)生顯著相關,然而腸道菌群與腸癌發(fā)生的因果關系尚未明確。本研究擬以腸腺瘤病小鼠模型Apcmin/+小鼠為研究對象,探討DCA促進腺瘤

2、惡變過程中腸道菌群的改變,運用菌群移植誘導腸腺瘤惡變并探索其機制。
  方法:
  第一部分為探討DCA促進Apcmin/+小鼠腺瘤惡變過程中腸道菌群改變,我們將4周齡野生型小鼠和 Apcmin/+小鼠分為三組:野生型組(含0.2% DCA飲用水)、Apcmin/+對照組(常規(guī)飲食水)和Apcmin/+DCA組(簡稱DCA組)。實驗0周和12周時收集新鮮糞便以行16S rRNA菌群檢測。顯微鏡下觀察并記錄腸道腺瘤的數(shù)目、大小

3、及分布情況。HE染色評估腸道腫瘤病理類型,免疫組化評估腫瘤細胞增殖情況,TUNEL技術(shù)評估腫瘤細胞凋亡。Realtime-PCR及免疫熒光評價腸道上皮緊密連接分子 mRNA和蛋白變化。實驗12周時予 FITC-D以評價Apcmin/+小鼠腸上皮通透性。
  第二部分為探討腸道菌群與腸癌發(fā)生的因果關系,將上述對照組和DCA組在實驗12周后停止DCA干預(經(jīng)2周DCA洗脫期),作為糞便供體。處理糞便制成糞菌液后以灌胃方式予實驗各組小鼠

4、(糞菌移植:FMT):FMT1組(植入DCA組糞便的野生型小鼠)、FMT2組(植入對照組糞便的Apcmin/+小鼠)、FMT3組(植入DCA組糞便的Apcmin/+小鼠)。各組小鼠于FMT前予鏈霉素預處理3天,8周實驗周期內(nèi)共行FMT16次。收集實驗8周時各組小鼠糞便檢測菌群變化。評估FMT后腸道腫瘤生長及細胞增殖情況。Realtime-PCR檢測FMT后腸粘膜炎性因子mRNA水平,同時檢測糞菌液刺激后結(jié)腸腫瘤細胞分泌的炎性因子mRNA

5、水平;并運用免疫熒光雙染等方法評價FMT后腸道腫瘤微環(huán)境中單核-巨噬系統(tǒng)活化情況。免疫組化和 Western blot方法檢測 TLR4/MyD88和Wnt/β-catenin信號通路蛋白表達情況。
  第三部分為進一步明確腸道菌群在腸癌發(fā)生中的重要作用,將4周齡Apcmin/+小鼠隨機分為兩組:DCA組和DCA聯(lián)合抗生素組(抗生素:0.2 g/L氨芐西林、0.1 g/L萬古霉素、0.2 g/L新霉素和0.2 g/L甲硝唑)。實驗

6、12周時處死小鼠,于解剖顯微鏡和HE染色觀察腸道腺瘤生長及癌變情況。
  結(jié)果:
  第一部分
 ?。?)實驗12周后野生型組小鼠腸道未出現(xiàn)腫瘤,且腸道組織結(jié)構(gòu)無明顯異常。對照組全腸道散在小腺瘤,多為管狀腺瘤,偶伴低級別上皮內(nèi)瘤變;DCA組腸道腺瘤總數(shù)明顯增多,以小腸中、遠段及大腸腺瘤數(shù)目顯著;腸道腺瘤成簇密集出現(xiàn),部分結(jié)腸近端有巨大腺瘤生長;遠段小腸及70%結(jié)腸腺瘤為粘膜內(nèi)癌,余30%結(jié)腸腺瘤為高級別上皮內(nèi)瘤變。同時

7、DCA使腸道腫瘤細胞增殖明顯增多,凋亡細胞數(shù)顯著下降。
 ?。?)DCA使腸道菌群多樣性明顯降低,并使厚壁菌門/擬桿菌門比例失衡。DCA加重腸道菌群失衡,表現(xiàn)為實驗12周較實驗0周時腸道菌群構(gòu)成中致病菌如梭菌屬、脫硫弧菌屬、埃希-志賀菌屬等比例明顯增高,而益生菌如乳酸桿菌屬、瘤胃球菌屬、毛螺旋菌等比例則降低。
 ?。?)DCA使腸組織炎性細胞因子基因表達水平顯著上調(diào)。
  (4)DCA下調(diào)腸上皮緊密連接蛋白指標ZO-1

8、及Claudin3基因表達水平;FITC-D示DCA使Apcmin/+小鼠腸上皮通透性顯著增加。
  第二部分
 ?。?)FMT1組腸道無腫瘤發(fā)生。FMT3組腸道腺瘤總數(shù)明顯增多,且72.7%(8/11)近段小腸腺瘤為粘膜內(nèi)癌;腫瘤細胞增殖指標Ki-67陽性細胞數(shù)明顯增多。
 ?。?)PCA分析顯示FMT2組與FMT3組腸道微生物群落在PC2與PC3維度上具有差異。實驗12周時 FMT3組厚壁菌門/擬桿菌門下降,腸道菌

9、群構(gòu)成中致病菌如埃希-志賀菌屬、副擬桿菌屬、脫硫弧菌屬、加式螺桿菌等明顯增多,而益生菌如乳酸桿菌屬、羅氏菌屬、瘤胃球菌屬、毛螺旋菌、柔嫩梭菌則明顯降低。
  (3)DCA組糞菌液刺激IMCE和HT-29細胞系后,炎性細胞因子基因水平明顯上調(diào)。FMT3組腸組織炎性細胞因子、MCP-1及巨噬細胞F4/80顯著增多;且腫瘤間質(zhì)中M2型巨噬細胞表面分子比例增多,而M1型巨噬細胞表面分子比例減少。
  (4)FMT3組腸道TLR4及M

10、yD88表達明顯上調(diào)、cadherin-E表達顯著減弱,β-catenin出現(xiàn)核異位表達,cyclin D1表達增多。
  第三部分
  從整體水平上調(diào)控腸道菌群可削弱 DCA誘導的 Apcmin/+小鼠腸道腫瘤進展,表現(xiàn)為腫瘤數(shù)目減少、直徑更小、癌變率降低。
  結(jié)論:
  DCA介導的腸道微生態(tài)失衡可破壞腸粘膜屏障,誘導腸道低度炎癥發(fā)生,通過激活單核-巨噬系統(tǒng),使巨噬細胞發(fā)生M1至M2型極化,進而激活腫瘤相關

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論