FXR在脫氧膽酸誘導(dǎo)胃黏膜腸上皮化生中的作用.pdf

1、我國是胃癌高發(fā)國家，決定胃癌患者預(yù)后的關(guān)鍵在于早期診斷和治療。早期胃癌和癌前病變首先引起胃粘膜小凹形態(tài)及微血管形態(tài)的微小改變。放大內(nèi)鏡、色素內(nèi)鏡及窄帶光譜技術(shù)的應(yīng)用使早期胃癌及癌前病變的診斷成為可能。
　　胃癌中以腸型胃癌為主，作為與腸型胃癌密切相關(guān)的癌前病變，胃粘膜腸上皮化生越來越受到重視。Cdx2是腸化生的重要調(diào)節(jié)因子，甚至可能是始動(dòng)因子，MUC2同為腸特異性基因，位于Cdx2基因下游，受Cdx2基因調(diào)控。
　　含有膽汁

2、酸的胃十二指腸反流引起的胃粘膜慢性炎癥和繼而發(fā)生的胃粘膜腸化生是胃癌發(fā)生的高危因素之一。FXR的研究提示，F(xiàn)XR在消化道腫瘤和癌前病變的發(fā)生中也起到自身獨(dú)特的作用。膽汁酸和FXR對(duì)于胃癌和胃粘膜腸化生的作用機(jī)制需要進(jìn)一步深入研究。
　　第一部分窄帶成像技術(shù)與色素放大內(nèi)鏡在早期胃癌及其癌前病變的應(yīng)用研究
　　目的：探討窄帶成像技術(shù)(NBI)與色素放大內(nèi)鏡在早期胃癌及其癌前病變的應(yīng)用價(jià)值。
　　方法：收集白光內(nèi)鏡下發(fā)現(xiàn)16

3、2例患者的188處胃粘膜可疑病灶，隨機(jī)分為兩組：NBI+靛胭脂(IC)組和NBI+腎上腺素(EP)組，依次采用白光內(nèi)鏡、NBI和IC/EP放大內(nèi)鏡的步驟進(jìn)行觀察，評(píng)價(jià)各種檢查方法中病變輪廓、腺管開口形態(tài)以及淺表毛細(xì)血管形態(tài)的清晰度；對(duì)病變的腺管開口和毛細(xì)血管進(jìn)行分型，并取活檢進(jìn)行病理學(xué)檢查；分別評(píng)價(jià)兩組NBI放大與靛胭脂/腎上腺素放大內(nèi)鏡對(duì)癌前病變和早癌的診斷價(jià)值并將兩者進(jìn)行比較；比較兩組不同染色方法與胃癌檢出率的關(guān)系。
　　結(jié)果

4、：
　　(1)NBI+IC和NBI+EP兩組在重度異型增生和胃癌的檢出率方面，在統(tǒng)計(jì)學(xué)方面無顯著性差異(x2=0.631，P>0.05)。
　　(2)在觀察病變輪廓的清晰度方面，NBI與靛胭脂/腎上腺素放大內(nèi)鏡相似(P分別為0.447和0.528)，但二者均優(yōu)于白光內(nèi)鏡(P值均<0.001)。
　　(3)在觀察病變粘膜腺管開口的清晰度方面，NBI放大內(nèi)鏡最清晰，靛胭脂/腎上腺素放大內(nèi)鏡次之，二者均優(yōu)于白光內(nèi)鏡(P值均<

5、0.001)。
　　(4)在觀察病變淺表毛細(xì)血管結(jié)構(gòu)形態(tài)的清晰度方面，NBI+IC組中NBI放大明顯優(yōu)于白光放大內(nèi)鏡和靛胭脂色素放大內(nèi)鏡(P值均<0.001)。NBI+EP組中腎上腺素放大評(píng)分最高，其次為NBI放大內(nèi)鏡，但兩者無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.101)；但二者均明顯優(yōu)于白光內(nèi)鏡(P值分別為0.000和0.000)(5)將病變粘膜腺管開口形態(tài)與病理組織學(xué)結(jié)果對(duì)比，發(fā)現(xiàn)NBI+IC和NBI+EP兩組胃粘膜炎癥主要表現(xiàn)為Ⅰ、Ⅱ型腺管

6、開口，萎縮主要表現(xiàn)為Ⅲ型腺管開口，腸上皮化生主要表現(xiàn)為Ⅲ、Ⅳ型，異型增生主要表現(xiàn)為Ⅳ型(少數(shù)為Ⅲ型)腺管開口，早癌主要表現(xiàn)為Ⅳ和Ⅴ型開口。
　　(6)將病變粘膜毛細(xì)血管形態(tài)與病理組織學(xué)結(jié)果對(duì)比，發(fā)現(xiàn)兩組胃粘膜炎癥、萎縮和腸上皮化生的毛細(xì)血管形態(tài)主要表現(xiàn)為Ⅰ、Ⅱ型，異型增生主要表現(xiàn)為Ⅱ型(少數(shù)表現(xiàn)為Ⅲ型)，早癌的毛細(xì)血管形態(tài)主要表現(xiàn)為Ⅱ和Ⅲ型。
　　(7)NBI+IC組NBI放大與靛胭脂放大內(nèi)鏡比較，對(duì)癌前病變?cè)\斷的準(zhǔn)確性、敏

7、感性、特異性方面，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=3.273，P>0.05；x2=2.057，P>0.10；x2=1.373，P>0.10)；NBI+EP組NBI放大與腎上腺素放大內(nèi)鏡比較，對(duì)癌前病變?cè)\斷的準(zhǔn)確性、敏感性、特異性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=1.353，P>0.25；x2=1.153，P>0.50；x2=0.259，P>0.75)。
　　(8)NBI+IC組NBI放大內(nèi)鏡與靛胭脂色素放大內(nèi)鏡比較，對(duì)胃癌診斷的準(zhǔn)確性、敏感性、特異

8、性方面，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=1.348，P>0.25；x2=1.222，P>0.50；x2=0.686，P>0.50，見表14)。NBI+EP組NBI放大與腎上腺素放大內(nèi)鏡比較，對(duì)胃癌診斷的準(zhǔn)確性、敏感性、特異性方面，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=0.4143，P>0.75；x2=1.091，P>0.50；x2=0.123，P>0.75)。
　　結(jié)論：
　　(1)NBI和靛胭脂放大內(nèi)鏡能清晰顯示病變輪廓和準(zhǔn)確識(shí)別病變的腺管開口

9、形態(tài)和淺表毛細(xì)血管形態(tài)改變，對(duì)可疑病變活檢具有較高的指導(dǎo)意義；
　　(2)NBI操作簡便，可作為色素內(nèi)鏡的補(bǔ)充性內(nèi)鏡檢查手段，應(yīng)用前景良好；
　　(3)腎上腺素的“微血管增強(qiáng)效應(yīng)”有助于早期胃癌病變的微血管形態(tài)清晰觀察，對(duì)早癌的診斷具有良好價(jià)值。
　　第二部分 FXR在脫氧膽酸誘導(dǎo)胃粘膜腸上皮化生中的作用目的：研究FXR在膽汁酸導(dǎo)致胃粘膜腸上皮化生發(fā)生中的作用機(jī)制。
　　方法：人胃粘膜上皮細(xì)胞(GES-1)為對(duì)象

10、，應(yīng)用MTT法研究不同濃度的脫氧膽酸(DCA)作用不同時(shí)間對(duì)GES-1細(xì)胞增殖的作用；應(yīng)用Real-time PCR和Western Blot方法，研究脫氧膽酸(DCA)對(duì)GES-1細(xì)胞表達(dá)腸上皮化生關(guān)鍵基因Cdx2及其下游基因MUC2的作用，應(yīng)用FXR激動(dòng)劑GW4064和拮抗劑Guggulsterone后，F(xiàn)XR、Cdx2和MUC2的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　(1)在低濃度范圍內(nèi)，DCA促進(jìn)GES-1細(xì)胞增殖，并且這種增

11、殖率的升高呈濃度依賴性(P<0.05)；在高濃度范圍，GES-1的生長受到抑制，增殖率下降。在作用時(shí)間方面，DCA短時(shí)間(6h)作用細(xì)胞增殖率最高，長時(shí)間(48h)時(shí)細(xì)胞增殖率最低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。
　　(2)GES-1細(xì)胞中FXR、Cdx2和MUC2 mRNA和蛋白表達(dá)，隨DCA的濃度增高呈濃度依賴性增高。DCA濃度400μmol/L時(shí)表達(dá)最強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；FXR和Cdx2的mRNA和蛋白表達(dá)

12、均在6h時(shí)最高，MUC2的mRNA和蛋白表達(dá)稍“滯后”于以上兩者，12h時(shí)表達(dá)最強(qiáng)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　(3)DCA400μmol/L+GW4064組FXR、Cdx2和MUC2的mRNA和蛋白表達(dá)顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而DCA400μmol/L+Guggulsterone的三者的mRNA和蛋白組表達(dá)顯著減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　(1)短時(shí)間、低

13、濃度的脫氧膽酸(DCA)對(duì)GES-1細(xì)胞起促進(jìn)增殖作用，而長時(shí)間、高濃度DCA抑制GES-1細(xì)胞增殖；
　　(2)DCA可誘導(dǎo)GES-1細(xì)胞的腸上皮化生關(guān)鍵基因Cdx2及其下游基因的表達(dá)，提示DCA在胃粘膜腸化生的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用；
　　(3)DCA可通過核受體FXR調(diào)控Cdx2及其下游相關(guān)基因表達(dá)，說明FXR可能是膽汁酸調(diào)控胃粘膜腸化生的途徑之一，為胃粘膜腸化生的發(fā)病機(jī)制提供新的思路，對(duì)于進(jìn)一步的胃粘膜異型增生甚