遺傳性角化性皮膚病基因型-表型關(guān)系研究.pdf

1、目的:（1）探究一例不典型掌跖角化癥（PPK）家系的遺傳學(xué)基礎(chǔ)并運(yùn)用電腦模擬和細(xì)胞功能試驗(yàn)結(jié)合的方法研究其基因型-表型關(guān)系。（2）研究靶向基因測序技術(shù)在診斷表型異質(zhì)性強(qiáng)的角化性皮膚病上的效率。通過上述研究旨在建立遺傳性皮膚病基因型-表型關(guān)系研究新模式。
　　方法:首先對該家系進(jìn)行PP K已知關(guān)聯(lián)基因全基因測序并對發(fā)現(xiàn)的突變構(gòu)建分子模型研究其對蛋白功能影響。用mCS M和DUET預(yù)測軟件給出自由能變化值(ΔΔG)并關(guān)聯(lián)基因型和表型，

2、同時通過 CCK8實(shí)驗(yàn)、anne x in-V f luo res c ein AP C/7-AAD雙染和細(xì)胞流式分析觀察在瞬轉(zhuǎn)四個突變體和野生型基因入H aCa T細(xì)胞后的細(xì)胞凋亡差異。構(gòu)建二代靶向基因測序平臺結(jié)合San ger測序診斷異質(zhì)性較大角化性皮膚病。
　　結(jié)果：（1）經(jīng)PP K相關(guān)基因全基因測序，僅在先證者、其母、其外公于TRPV3基因發(fā)現(xiàn)致病突變：c.2016 G>A;（2）突變Gln580Pro引起的ΔΔG為正值則

3、對應(yīng)最輕的臨床表型。其余八個點(diǎn)突變引起的ΔΔG為負(fù)值對應(yīng)相對較重的表型，而在這八個突變中Met672IIe引起的ΔΔG值雖為負(fù)值但絕對值最小則對應(yīng)的表型相對其他七個點(diǎn)突變引起者較輕；（3） CCK8實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)TRPV3基因4個點(diǎn)突變：G573C，W692G，M672I，Q580P在12,24,48,72h時點(diǎn)轉(zhuǎn)染HaC aT細(xì)胞后引起細(xì)胞凋亡效應(yīng)均強(qiáng)于野生型，且峰值均在48h，其中 G573C，W692G引起的細(xì)胞凋亡要更顯著，而M672

4、I，Q580P引起的細(xì)胞凋亡效應(yīng)相對較弱；而G573C，W692G對應(yīng)的患者表型相對較重，M672I，Q580P對應(yīng)的表型則相對較輕和不典型；（4）細(xì)胞流式分析發(fā)現(xiàn)不同的點(diǎn)突變：G573C，W692G，M672I，Q580P，G573C，W692G引起的細(xì)胞凋亡數(shù)明顯多于M672I，Q580P者。（5）二代靶向基因測序平臺成功診斷表型異質(zhì)性大且臨床罕見的Neu-Laxo va綜合征和Mal d e Me led a病各2例，均為亞洲首報(bào)

5、。
　　結(jié)論：（1）TRPV3基因突變：c.2016 G>A是該漢族不典型Olmsted綜合征的致病突變，同時本研究報(bào)道的錐形手、硬皮病樣外觀等體征豐富了Olmsted的表型；
　　（2）電腦模擬預(yù)測軟件和離體細(xì)胞功能試驗(yàn)共同證實(shí)了Olmsted綜合征潛在的基因型-表型關(guān)系，同時也建立了遺傳性皮膚病基因型-表型關(guān)系的新的研究模式；
　?。?）通過遺傳學(xué)研究進(jìn)一步證實(shí)缺乏典型診斷標(biāo)志如：腔口周圍角化,假性阿洪,禿發(fā)等不典