PKC-α-Nrf2-HO-1信號通路在電針干預(yù)兔內(nèi)毒素休克急性肺損傷中的作用.pdf

1、背景：內(nèi)毒素休克可致急性肺損傷，嚴(yán)重者可導(dǎo)致急性呼吸窘迫綜合癥(ARDS)甚至多器官功能衰竭，病死率較高。研究證實，電針刺激足三里和肺俞穴，可減輕內(nèi)毒素休克所致急性肺損傷。蛋白激酶 C(PKC)屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族，廣泛存在于機體的組織細胞內(nèi)，它包括12種同工酶，PKC-α是其中之一且經(jīng)常用來作為研究對象。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，Nrf2-ARE通路激活后可使內(nèi)毒素休克致急性肺損傷減輕。作為 Nrf2-ARE通路的下游基因，血紅

2、素氧合酶（HO-1）在應(yīng)激狀態(tài)下，與其催化產(chǎn)物在機體發(fā)揮重要的內(nèi)源性保護作用。通過對相關(guān)文獻報道的查閱，我們尚未發(fā)現(xiàn)在對內(nèi)毒素致兔急性肺損傷模型得研究中，有人將電針刺干預(yù)與PKC-α- Nrf2/HO-1信號通路的關(guān)系進行過闡述。
　　目的：本研究擬通過觀察兔內(nèi)毒素休克致急性肺損傷模型中，不同組別肺組織病理學(xué)改變及分子層面各項研究指標(biāo)表達水平的變化,來明確 PKC-α-Nrf2/HO-1通路在電針刺激相關(guān)穴位（足三里、內(nèi)關(guān)穴和肺俞

3、穴）,干預(yù)兔內(nèi)毒素休克致急性肺損傷中的作用。
　　方法：健康雄性新西蘭大白兔80只，2月齡，體重1.5~2.0Kg，采取隨機數(shù)字表法分為8組(n=10)：對照組(C組)、內(nèi)毒素休克所致急性肺損傷組( L組)、電針刺激穴位+L組(EL組)、電針刺激非穴位+L組(SEL組)、PKC抑制劑白屈菜紅堿組（Che組）、二甲基亞砜組（E組）、PKC抑制劑+L組（LC組）、電針刺+PKC抑制劑+L組（ELC組）。EL組、ELC組電針刺激雙側(cè)足三

4、里、內(nèi)關(guān)穴和肺俞穴，疏密波，頻率2Hz/15Hz，刺激電流1~2mA，波寬0.2~0.6ms，刺激強度以兔肢體出現(xiàn)與電針頻率一致的輕微顫動為宜，1次/d，30min/次，連續(xù)5d；SEL組電針刺激足三里、內(nèi)關(guān)穴和肺俞穴旁開0.5cm非經(jīng)非穴處，針刺參數(shù)同 EL組。實驗當(dāng)日，電針刺貫穿整個實驗過程。實驗開始后，按實驗組別分別進行處理。Che組及 LC組經(jīng)耳緣靜脈注射白屈菜紅堿5mg/kg（溶于0.5ml0.1％二甲基亞砜），E組靜脈注射0

5、.1%二甲基亞砜0.5ml，其余組給予等容量的生理鹽水；30分鐘后L組、EL組、SEL組、LC組及ELC組經(jīng)兔耳緣靜脈給予 LPS5mg/kg(溶于2ml生理鹽水)，其余組給予等容量的生理鹽水。以注射 LPS2h內(nèi)平均動脈壓下降≥基礎(chǔ)值的25%為模型制備成功。兔耳緣靜脈靜脈注射 LPS或生理鹽水后6h時，取頸總動脈血行血氣分析后處死大白兔，取肺組織，進行病理學(xué)觀察及肺損傷評分，計算肺組織濕/干重比(W/D)，測定肺組織勻漿中 MDA含量

6、及 SOD活性，檢測 Nrf2mRNA、HO-1mRNA、HO-1蛋白、Nrf2核蛋白和總蛋白以及PKC-α蛋白表達水平。
　　結(jié)果：與C組相比，L組、EL組、SEL組、LC組及ELC組SOD活性活性降低，肺組織病理學(xué)評分、W/D、MDA含量升高，Nrf2 mRNA、HO-1mRNA、HO-1蛋白、PKC-α蛋白及Nrf2核蛋白和總蛋白表達上調(diào)(P<0.05)， Che組、E組上述各指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；與 L組相

7、比，EL組肺組織病理學(xué)評分、W/D、MDA含量降低，SOD活性升高，Nrf2mRNA、HO-1mRNA、HO-1蛋白、PKC-α、Nrf2核蛋白及總蛋白表達上調(diào)(P<0.05)，LC組、ELC組肺組織病理學(xué)評分、W/D、MDA含量升高， SOD活性下降， Nrf2mRNA、HO-1mRNA、HO-1蛋白、PKC-α蛋白及 Nrf2核蛋白和總蛋白表達下調(diào)（P<0.05）， SEL組上述指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；與EL組相比，S

8、EL組、ELC組肺組織病理學(xué)評分、W/D、MDA含量升高，SOD活性降低，Nrf2mRNA、HO-1mRNA、HO-1蛋白、PKC-α蛋白及 Nrf2核蛋白和總蛋白表達下調(diào)(P<0.05)；與 LC組相比，ELC組肺組織病理學(xué)評分、W/D、MDA含量降低，SOD活性升高，Nrf2mRNA、HO-1mRNA、HO-1蛋白、PKC-α蛋白及 Nrf2核蛋白和總蛋白表達上調(diào)（P<0.05）。
　　結(jié)論：電針刺干預(yù)兔內(nèi)毒素休克肺損傷中，可