碳納米管攜載阿霉素對人卵巢癌SKOV3-ADM細(xì)胞增殖、遷移及耐藥研究.pdf

1、目的:為了增強(qiáng)阿霉素(adriamycin，ADM)的抗癌效果,制備攜載阿霉素單壁碳納米管藥物（ ADM/PEG/SWCNTs），并探討其對人卵巢癌細(xì)胞阿霉素耐藥株（SKOV3/ADM）的體外毒性、耐藥及遷移能力影響。
　　方法：1、以羧基化超高純單壁碳納米管（SWCNTs-COOH）為原料，先采用化學(xué)共價(jià)結(jié)合雙端氨基化的聚乙二醇NH2-PEG-NH22000，再物理吸附ADM,制備ADM/PEG/SWCNTs復(fù)合物。2、應(yīng)用傅里

2、葉變換紅外光譜儀表征PEG/SWCNTs表面官能團(tuán)的改變；紫外可見光光度計(jì)測定載藥量。3、WST-1法檢測不同濃度不同時(shí)間的ADM/PEG/SWCNTs及ADM對SKOV3/ADM的增殖抑制作用；SPSS軟件分別計(jì)算出IC50(half maximal inhibitory concentration，IC50％抑制濃度)，同時(shí)用ADM/PEG/SWCNTs的IC50濃度下的PEG/SWCNTs、ADM、ADM/PEG/SWCNTs藥物

3、分別作用細(xì)胞，分別檢測24h、48h和72h不同時(shí)段的細(xì)胞增殖抑制率。4、流式細(xì)胞術(shù)測定各組藥物誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡的變化。5、hoechst33258熒光染色在形態(tài)上觀察細(xì)胞凋亡的變化。6、應(yīng)用普通PCR方法從檢測藥物處理后各組細(xì)胞MDR-1mRNA的表達(dá)情況。7、提取總蛋白，利用Western blotting法測定各組細(xì)胞中P-gp蛋白的表達(dá)量。8、采用Transwell小室方法檢測藥物處理SKOV3/ADM細(xì)胞后的體外遷移能力。

4、>　　結(jié)果：1、成功制備PEG/SWCNTs及ADM/PEG/SWCNTs復(fù)合藥物。2、ADM在PEG/SWCNTs的載藥率為（79.5±10.6）%及其包封率為（32.0±4.2）%。3、WST-1實(shí)驗(yàn)顯示，ADM/PEG/SWCNTs及ADM作用癌細(xì)胞50%抑制濃度為18μg/ml（此為荷載ADM的濃度）和37.5μg/ml，作用時(shí)間均為48h。與ADM原藥組比較，同一濃度的ADM/PEG/SWCNTs對SKOV3/ADM細(xì)胞呈現(xiàn)明

5、顯抑制作用（P＜0.01），且隨著作用時(shí)間的延長，呈持續(xù)抑制狀態(tài)。4、流式細(xì)胞術(shù)檢測ADM/PEG/SWCNTs組及ADM原藥組SKOV3/ADM細(xì)胞凋亡率為(14.83±1.86）%VS（5.28±0.45）%,組間比較，P<0.01，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5、hoechst33258熒光染色與流式細(xì)胞術(shù)檢測凋亡結(jié)果相吻合，而且也驗(yàn)證了WST-1的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，即在細(xì)胞形態(tài)學(xué)上顯示出納米藥物組凋亡細(xì)胞最多（F=12.930，P=0.007）