銀杏葉提取物對(duì)帕金森疾病動(dòng)物模型的治療作用研究.pdf

1、帕金森?。╬arkinson’s disease，PD)是一種慢性神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，以中腦黑質(zhì)DA能神經(jīng)元選擇性丟失為特征，進(jìn)而導(dǎo)致紋狀體DAT水平降低，引發(fā)一系列典型癥狀如震顫、肌肉強(qiáng)直和運(yùn)動(dòng)障礙等。到目前為止，PD的治療手段還不完善，沒有任何一種治療手段能夠完全治愈PD。中醫(yī)在治療PD上越來越受到重視。研究表明銀杏葉提取物(ginkgo biloba extract，GBE)主要有效成分為黃酮類和萜類內(nèi)酯化合物，藥理研究表明它具有

2、很好的神經(jīng)保護(hù)作用，在治療PD上可能有著重要的作用。
　　本論文以α-突觸核蛋白(alpha-synuclein，α-syn)基因A53T突變型轉(zhuǎn)基因PD小鼠以及MPTP制備不同年齡段的PD小鼠為模型，探討α-syn A53T突變型轉(zhuǎn)基因小鼠PD模型的發(fā)病機(jī)制和MPTP誘導(dǎo)的PD模型發(fā)病機(jī)制；明確GBE對(duì)MPTP誘導(dǎo)不同年齡段的PD小鼠以及α-syn A53T轉(zhuǎn)基因PD小鼠的防治作用，為開發(fā)具有抗PD作用的天然藥物提供科學(xué)依據(jù)。<

3、br>　　1.α-syn A53T轉(zhuǎn)基因PD小鼠的繁育及基因鑒定、生理特性。
　　購入a-syn A53T轉(zhuǎn)基因PD小鼠12只，其中9只雌鼠，3只雄鼠，經(jīng)檢疫合格后，飼養(yǎng)小鼠待其達(dá)到10周齡左右合籠交配。繁殖飼養(yǎng)約四個(gè)月，預(yù)計(jì)繁殖出2代。抽提子代小鼠鼠尾的DNA，PCR檢測(cè)α-syn A53T基因，電泳后觀察結(jié)果。采血檢測(cè)血常規(guī)；處死小鼠，稱體重以及各器官的重量，計(jì)算臟器系數(shù)。結(jié)果表明：經(jīng)過α-syn A53T基因鑒定，共繁育野生

4、型小鼠總數(shù)為69只，PD基因陽性小鼠為79只；α-syn A53T PD模型對(duì)動(dòng)物的血常規(guī)參數(shù)幾乎沒有影響；脾臟系數(shù)和腎臟系數(shù)差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；其他系數(shù)差異不顯著沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.α-syn A53T轉(zhuǎn)基因PD小鼠模型不同月齡的發(fā)病機(jī)制。
　　飼養(yǎng)α-syn A53T突變型轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠，分析不同月齡（4月齡、6月齡、8月齡）對(duì)α-syn A53T突變型轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠在運(yùn)動(dòng)能力、腦組織內(nèi)SOD、

5、GSH-PX活性及MDA含量以及黑質(zhì)TH陽性神經(jīng)元和紋狀體DAT陽性神經(jīng)纖維表達(dá)的變化。結(jié)果表明：和野生型小鼠相比，4月齡、6月齡和8月齡的α-syn A53T突變型轉(zhuǎn)基因PD模型小鼠的爬桿能力、游泳能力以及懸掛能力顯著降低；SOD、GSH-PX活性顯著下降，MDA表達(dá)水平顯著上升，黑質(zhì)中TH和紋狀體中DAT表達(dá)顯著下降。隨著月齡的增加，突變型轉(zhuǎn)基因小鼠的運(yùn)動(dòng)能力顯著降低；抗氧化能力下降，黑質(zhì)中TH和紋狀體中DAT表達(dá)顯著下降。

6、　　3.MPTP化學(xué)誘導(dǎo)的PD模型發(fā)病機(jī)制。
　　飼養(yǎng)2月齡、8月齡的C57BL/6雄性小鼠，模型組給予MPTP(30mg/kg)腹腔注射造模，分析不同月齡（2月齡、8月齡）對(duì)MPTP誘導(dǎo)的PD模型運(yùn)動(dòng)能力、腦組織內(nèi)SOD、GSH-PX活性及MDA水平以及黑質(zhì)TH陽性神經(jīng)元和紋狀體DAT陽性神經(jīng)纖維表達(dá)的變化。結(jié)果表明：小鼠注射MPTP后立刻出現(xiàn)全身震顫、豎毛、尾僵直、步態(tài)不穩(wěn)、活動(dòng)能力減弱等癥狀。2月齡和8月齡的陰性對(duì)照組小鼠和

7、MPTP誘導(dǎo)的PD模型小鼠相比，小鼠的爬桿能力、游泳能力以及懸掛能力顯著降低；SOD、GSH-PX活性顯著下降，MDA表達(dá)水平顯著上升，黑質(zhì)中TH和紋狀體中DAT表達(dá)顯著下降。2月齡的MPTP誘導(dǎo)的PD模型小鼠和8月齡的MPTP誘導(dǎo)的PD模型小鼠相比，小鼠的爬桿能力、游泳能力以及懸掛能力、SOD、GSH-PX活性、MDA表達(dá)、黑質(zhì)中TH和紋狀體中DAT表達(dá)均沒有顯著變化。
　　4.觀察銀杏葉提取物（GBE）對(duì)PD小鼠的治療效果。<

8、br>　　MPTP誘導(dǎo)的2月齡和8月齡年齡段的帕金森小鼠以及α-syn A53T突變型轉(zhuǎn)基因4月齡小鼠各隨機(jī)分為模型組，GBE給藥高、中、低劑量組及陽性組，采用銀杏葉提取物進(jìn)行灌胃治療。運(yùn)用爬桿、懸掛和游泳實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠運(yùn)動(dòng)功能，采用ELISA法測(cè)定小鼠腦組織SOD、GSH-Px活性及MDA含量，采用免疫組化法觀察小鼠大腦TH及DAT陽性細(xì)胞數(shù)目的變化。結(jié)果表明：與模型組比較，銀杏葉提取物給藥組2月齡和8月齡MPTP誘導(dǎo)PD小鼠運(yùn)動(dòng)功能得

9、分、SOD與GSH-Px活性、黑質(zhì)TH陽性細(xì)胞平均光密度值均顯著提高，MDA含量顯著下降，2月齡和8月齡之間比較所有參數(shù)沒有顯著變化。與模型組比較，銀杏葉提取物給藥組4月齡α-syn A53T突變型轉(zhuǎn)基因小鼠運(yùn)動(dòng)功能得分、SOD活性、黑質(zhì)TH及紋狀體DAT陽性細(xì)胞平均光密度值均顯著提高，腦組織MDA含量顯著下降。
　　本研究通過建立α-syn A53T轉(zhuǎn)基因小鼠PD模型和MPTP化學(xué)誘導(dǎo)PD模型并對(duì)兩種模型的發(fā)病特征分析，表明α-