厚樸酚的免疫抗炎作用及其對相關信號轉導通路的調控.pdf

1、厚樸酚是一種聯苯酚類化合物，是中國傳統(tǒng)中藥厚樸的主要活性成分，既往研究表明厚樸酚具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗哮喘、抗氧化、保護心腦血管、抗?jié)?、?zhèn)痛、激素調節(jié)等多種藥理學作用。目前，對厚樸酚免疫活性和抗炎活性的研究取得一定成果，但其作用機制仍待進一步拓展研究。
　　目的：
　　本實驗旨在對厚樸酚對人相關免疫細胞活性及功能的影響進行初步研究，在建立人源U937巨噬細胞炎癥模型的基礎上，研究厚樸酚的抗炎活性，并對其作用機制

2、進行初步探討。以期豐富厚樸酚免疫抗炎活性基礎研究實驗數據，為其作為相關抗炎藥物的研發(fā)提供實驗依據和參考。
　　方法：
　　我們通過MTT法檢測厚樸酚對U937巨噬細胞及人LO-2正常肝細胞的毒性，確定厚樸酚無毒濃度范圍；流式細胞術和激光共聚焦檢測厚樸酚對U937巨噬細胞巨噬細胞吞噬功能的影響；CCK-8法檢測厚樸酚對人外周血淋巴細胞（PBMC）、T細胞增殖活性的影響；通過脂多糖（LPS）誘導成熟分化的U937巨噬細胞來構建細

3、胞炎癥模型；Griess試劑檢測厚樸酚對LPS誘導 U937巨噬細胞生成NO的影響；Real-time PCR檢測厚樸酚對LPS誘導U937巨噬細胞表達炎性因子的影響；ELISA法檢測厚樸酚對LPS誘導U937巨噬細胞分泌炎性因子的影響；Western blotting和激光共聚焦檢測厚樸酚對LPS誘導U937巨噬細胞相關信號通路的影響。
　　結果：
　　厚樸酚濃度≤40μM時，對U937巨噬細胞無毒；其濃度在10-40μM

4、時呈濃度依賴性增強細胞吞噬功能，40μM時對細胞吞噬功能增強近50％；1-20μM濃度范圍，厚樸酚對PBMC的存活有明顯抑制作用；1μM時對T細胞的增殖有明顯抑制作用，而10、20μM則起促進作用。在1-40μM濃度范圍，能顯著抑制LPS誘導引起的NO產生；能濃度依賴性抑制IL-1β、TNF-α的mRNA表達，40μM高濃度時效果最顯著；能濃度依賴性抑制IL-1β蛋白的分泌，當濃度為10、20μM時，對TNF-α蛋白的分泌無明顯影響，而

5、在40μM時則有顯著抑制作用；其對MAPK信號通路中的ERK1/2部分并無明顯影響，能下調JNK、p38的磷酸化水平；其能抑制NF-κB信號通路中IκBα的磷酸，濃度依賴性下調p65的磷酸化水平。
　　結論：
　　厚樸酚在體外能增強U937巨噬細胞的吞噬功能；抑制PBMC的存活；低濃度能抑制T細胞增殖，高濃度則起促進作用。有明顯的抗炎活性，可能是通過下調MAPK信號通路JNK、p38的磷酸化水平，下調NF-κB信號通路中Iκ