糖尿病前期和2型糖尿病患者血漿中差異表達microRNAs的篩選及臨床診斷價值研究.pdf

1、目的：本實驗通過分析正常對照組、2型糖尿?。═2D）患者和糖尿病前期患者血漿微小核糖核酸（ miRNA）表達譜的變化，發(fā)現(xiàn)差異表達的miRNAs，并從血漿miRNA水平探討T2D的發(fā)病機制，為T2D早期診斷尋找可能的新的生物標志物。
　　方法：（1）采集糖尿病前期組、T2D組和健康對照組各3例血漿，提取RNA，利用安捷倫miRNA芯片檢測miRNAs表達量，并根據(jù)芯片結(jié)果，從中挑選兩兩對比表達均有顯著性差異的miRNAs以進行后續(xù)

2、驗證分析。（2）于2014年3月～2015年10月，收集年齡及性別匹配的、由貴州省人民醫(yī)院內(nèi)分泌科門診確診為T2D和糖尿病前期病人以及同期健康體檢正常者各50例血漿樣本，對研究對象的臨床數(shù)據(jù)進行分析，并提取樣本RNA，采用SYBR Green法進行實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（qRT-PCR）驗證差異表達的miRNAs在3組樣本中的表達情況。（3）在生物信息學數(shù)據(jù)庫—Targetscan、microRNAorg和pita，對miRNA靶基

3、因進行預(yù)測，得到在3個數(shù)據(jù)庫均有預(yù)測的miRNA靶基因并分析其生物學功能。（4）最后用統(tǒng)計學分析并進一步建立受試者工作曲線（ROC曲線），再通過計算ROC曲線下面積（AUC）來判斷每一個miRNA的臨床診斷能力。
　　結(jié)果：（1）同正常對照組相比，空腹血糖（FPG）、餐后2小時血糖（2hPG）和糖化血紅蛋白（HbA1c）在糖尿病前期和T2D組中呈現(xiàn)顯著性遞增（P＜0.0001）。（2）miRNA芯片分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在健康對照組、T2

4、D和糖尿病前期中， hsa-miRNA-1249（ hsa-miR-1249）、hsa-miR-320b和hsa-miR-6069呈遞減式下調(diào)，而hsa-miR-572在T2D、糖尿病前期和健康對照組中遞減式下調(diào)。（3）通過qRT-PCR驗證顯示：hsa-miR-1249在健康對照組、T2D和糖尿病前期中呈遞減式下調(diào)，hsa-miR-320b在健康對照組、糖尿病前期和T2D中呈遞減式下調(diào)，hsa-miR-572在T2D、糖尿病前期和健康

5、對照組中遞減式下調(diào)，而hsa-miR-6069未得到驗證。qRT-PCR驗證結(jié)果與芯片結(jié)果基本一致。（4）hsa-miR-1249預(yù)測到相應(yīng)靶基因18個，hsa-miR-572找到29個，hsa-miR-320b找到915個，GO和KEGG通路分析得到這些靶基因主要與多細胞有機體的發(fā)展、信號轉(zhuǎn)導、細胞分化、凋亡、離子轉(zhuǎn)運、細胞代謝過程調(diào)控等生物學功能相關(guān)。（5）對于區(qū)分T2D和正常對照組， hsa-miR-1249、hsa-miR-32

6、0b和hsa-miR-572的AUC值分別為0.784（95％CI：0.685～0.883）、0.946（95%CI：0.906～0.985）和0.843（95%CI：0.766～0.920），而對于區(qū)分糖尿病前期和正常對照組，hsa-miR-1249、hsa-miR-320b和hsa-miR-572的AUC值分別為0.887（95%CI：0.818～0.957）、0.635（95%CI：0.525～0.744）和0.69（95%CI：