富血小板纖維蛋白提取液對TNF-α刺激的人牙周膜細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:
　　本實(shí)驗(yàn)通過檢測富血小板纖維蛋白提取液（Platelet-rich fibrin extract。PRFe）對腫瘤壞死因子α（Tumor necrosis factor-α。TNF-α）刺激下的人牙周膜細(xì)胞（Human Periodontal Ligament Cells。hPDLCs）成骨分化及礦化效能的影響，為富血小板纖維蛋白用于臨床牙周炎再生性相關(guān)治療提供實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)。
　　方法:
　　實(shí)驗(yàn)一：組織塊

2、法分離培養(yǎng)hPDLCs，免疫組化法鑒定細(xì)胞來源
　　實(shí)驗(yàn)二：Choukroun法制取 PRFe。MTT法檢測不同體積分?jǐn)?shù)的PRFe對hPDLCs增殖活性的影響以確定最適宜體積分?jǐn)?shù)的PRFe用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　實(shí)驗(yàn)三：PRFe對經(jīng)TNF-α刺激下的人牙周膜細(xì)胞成骨效能的影響。
　?、艑?shí)驗(yàn)分組①空白對照組；②TNF-α（10ng/mL）組；③PRFe組；④PRFe+TNF-α（10ng/mL）組
　?、茐A性磷酸酶試劑

3、盒檢測各實(shí)驗(yàn)組ALP活性
　?、擒缢丶t染色法觀察各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞礦化功能
　?、萕estern Blotting法檢測各組細(xì)胞中Runx2、Osterix蛋白的含量。
　　結(jié)果:
　　1.倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)呈長梭形。牙周膜細(xì)胞波形絲蛋白染色陽性，而角蛋白14染色陰性，證實(shí)細(xì)胞為間充質(zhì)來源而非上皮性來源。
　　2. MTT法檢測不同體積分?jǐn)?shù)的PRFe對 hPDLCs增殖活性的影響，結(jié)果顯示50％體積分?jǐn)?shù)

4、的PRFe吸光度值高于其他實(shí)驗(yàn)組（P＜0.05）。
　　3.選擇體積分?jǐn)?shù)為50%的PRFe用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，ALP活性檢測、茜素紅染色和Western Blotting結(jié)果顯示：
　?、賂NF-α組各項(xiàng)指標(biāo)均低于空白對照組（P＜0.05）
　?、赑RFe組各項(xiàng)指標(biāo)均高于空白對照組（P＜0.05）
　?、跴RFe+TNF-α組各項(xiàng)指標(biāo)均高于TNF-α組（P＜0.05）
　　④PRFe組各項(xiàng)指標(biāo)均高于PRFe+TN