不同方法制備富血小板纖維蛋白對脂肪干細胞體外增殖影響的實驗研究.pdf

1、目的：旨在通過不同離心速度及離心時間制備富血小板纖維蛋白(platelet-rich fibrin，PRF)，比較其內(nèi)所含生長因子特別是血小板衍生生長因子-AB（Platelet-derived growth factor，PDGF-AB）和轉(zhuǎn)化生長因子-β1（Transforming growth factor-beta1，TGF-β1）含量及其對脂肪來源干細胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)體外增

2、殖的情況，為將制備出優(yōu)良的PRF應(yīng)用于軟組織創(chuàng)面修復提供實驗依據(jù)。
　　方法：取新西蘭大耳白兔腹股溝部脂肪組織，使用膠原酶消化法處理脂肪組織，培養(yǎng)原代脂肪干細胞，觀察細胞形態(tài)及變化，通過血球計數(shù)板于倒置顯微鏡下計數(shù)并繪制細胞生長曲線圖，收集第3代細胞進行體外三系誘導分化，在誘導7天、14天、28天時間里，分別加入成脂誘導液培養(yǎng)基后行油紅O染色、成骨誘導液培養(yǎng)基后行VonKossa染色、成神經(jīng)誘導液培養(yǎng)基后行免疫細胞熒光檢測，鑒定A

3、DSCs多向分化潛能；取新西蘭大耳白兔自體靜脈血，分別以不同速度（2700r/min、3000r/min、3300r/min）、不同時間（10min、15min、20min）離心制備PRF，通過ELISA試劑盒對每個PRF在靜置7天、14天、21天時間里，釋放液中TGF-β1和PDGF含量進行檢測，觀察各組生長因子的濃度差異；CCK-8比色法檢測不同方法制備的PRF對ADSCs細胞體外增殖活性的影響。
　　結(jié)果：原代培養(yǎng)脂肪干細胞

4、呈成纖維細胞樣貼壁生長，具有很強的增殖能力，并成功向成神經(jīng)元細胞、骨組織細胞和脂肪細胞誘導分化，即具有干細胞特性，因而所培養(yǎng)的細胞為脂肪來源干細胞（ADSCs）。同一靜置時間下，以2700r/min，15min組制備的PRF釋放PDGF-AB、TGF-β1的含量顯著高于10min組及20min組；以3000r/min，10min組制備的PRF釋放PDGF-AB、TGF-β1的含量顯著高于15 min組及20min組；且2700r/min

5、，15min組制備的PRF釋放PDGF-AB、TGF-β1的含量顯著高于3000r/min，10min組(P﹤0.05)；以3300r/min組的離心速度下，不同離心時間制備的PRF釋放PDGF-AB、TGF-β1的含量無統(tǒng)計學意義(P﹥0.05)。CCK-8比色法檢測2700r/min，15min組制備的PRF對ADSCs增殖的OD值高于3000r/min及3300 r/min組(P<0.05)。
　　結(jié)論：來源于動物脂肪吸收物