富血小板血漿促進大鼠脂肪干細胞增殖和軟骨樣分化.pdf

1、目的:
　　 探討緩沖過的、未激活的富血小板血漿(Buffered PRP)的培養(yǎng)基是否能夠促進脂肪基質干細胞(ADSCs)軟骨樣分化和增殖。
　　 方法:
　　 分離、培養(yǎng)Wistar大鼠的ADSCs;采用免疫熒光法進行鑒定;從Wistar大鼠動脈血中提取PRP,并制備Buffered PRP;ADSCs分別在加有10％Buffered PRP的DMEM培養(yǎng)基和正常DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng);誘導一周后細胞爬片行免疫

2、組化鑒定Ⅱ型膠原表達,甲苯胺藍染色鑒定蛋白聚糖表達;將實驗組和對照組于1、3、5、7天行MTT法測定其增殖活性。
　　 結果:
　　 成功分離、培養(yǎng)Wistar大鼠的ADSCs:免疫熒光法鑒定細胞表面標志CD44、CD29表達陽性;在10％Buffered PRP培養(yǎng)基中,甲苯胺藍可以和細胞內和細胞外基質中的硫酸蛋白多糖的硫酸基特異性結合,在誘導培養(yǎng)7天的細胞甲苯胺藍染色可見細胞漿內藍色異染,蛋白多糖表達結果表達陽性,說

3、明細胞有較強的蛋白多糖合成能力;實驗組Ⅱ型膠原免疫組化結果顯示細胞呈陽性,可見棕黃色顆粒分布于細胞漿內,而對照組則為陰性,并對免疫組化結果應用SPSS13.0軟件對其灰度值統(tǒng)計學分析P＜0.05,而正常培養(yǎng)基中的細胞未有明顯變化;將實驗組和對照組于1、3、5、7天行MTT法測定其增殖活性,MTT檢測Buffered PRP誘導組較對照組增殖明顯(P＜0.01)。結果顯示PRP對脂肪干細胞有明顯的促增殖作用。
　　 結論:

4、　　 本試驗研究證明從大鼠脂肪組織中可提取出脂肪干細胞,在單層培養(yǎng)條件下,實驗組免疫組化Ⅱ型膠原呈陽性,甲苯胺藍染色也是陽性,對照組均呈陰性,MTT法測出實驗組細胞較對照組細胞增殖明顯,該實驗證明了未激活、緩沖過的10％PRP能夠促進脂肪干細胞的增殖和軟骨方向分化。本實驗中所得到的結果為軟骨修復的組織工程學研究和臨床應用提供了新的科學依據。Buffered PRP的培養(yǎng)基能夠促進脂肪基質干細胞(ADSCs)軟骨樣分化和增殖,為軟骨修復