自體富血小板血漿治療大鼠脊髓損傷實驗研究.pdf

1、[背景和目的]脊髓損傷是一種常見的、多發(fā)的疾病，主要是由于運動、高空墜落、交通事故、工傷等原因造成的。脊髓損傷是一種創(chuàng)傷性疾病，一旦發(fā)生將給患者帶來終身痛苦，患者將會喪失部分或全部運動及感覺功能，從而癱瘓在床，喪失勞動能力，生活不能自理，給家庭及社會帶來極大的負(fù)擔(dān)。目前，脊髓損傷的發(fā)病率正隨著社會的不斷發(fā)展而上升，因此對損傷脊髓的修復(fù)研究也成為了現(xiàn)在世界各國研究的熱點問題。主要的研究方向體現(xiàn)在以下幾個方面：一、細(xì)胞移植和脊髓移植方面：如

2、將嗅鞘細(xì)胞、雪旺氏細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、臍血干細(xì)胞、胎兒脊髓組織移植等來修復(fù)脊髓損傷；二、基因水平上的研究：通過抑制凋亡基因的表達(dá)從而抑制神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，保護(hù)受損脊髓組織；三、利用一些生物活性制劑如神經(jīng)生長因子、激素以及促神經(jīng)生長的藥物等保護(hù)受損的神經(jīng)組織，促進(jìn)其再生；四、減少脊髓損傷區(qū)的疤痕形成；五、利用大網(wǎng)膜移植來恢復(fù)和重建受損傷脊髓的血運，促進(jìn)其再生。以上的各種方法雖然都有一定的作用，但是距離完全修復(fù)受損傷脊髓，恢復(fù)原有運動及感覺功能

3、的目標(biāo)還有很長一段路要走，所以修復(fù)脊髓損傷的課題目前仍是各國研究的熱點問題。本實驗建立大鼠急性脊髓壓迫損傷模型，采用自體富血小板血漿直接注入到大鼠損傷脊髓處，通過病理切片觀察、誘發(fā)電位、斜板試驗、BBB量表、免疫組化、計算機圖形處理、western-blot等技術(shù)觀察自體富血小板血漿對脊髓損傷大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)、損傷脊髓處神經(jīng)纖維穿越膠質(zhì)瘢痕能力及神經(jīng)營養(yǎng)因子NGF、BDNF表達(dá)的影響。
　　[方法]SD大鼠，全部為雄性，按實驗需要

4、根據(jù)隨機數(shù)字表法隨機分為PRP治療組(A組)、對照組(B組)。兩組均采用眶后采血方法采血2ml，A組血樣采用改良Appel法制取PRP，B組血樣制取自體血漿，即用冷凍離心機在220g離心力作用下離心20分鐘，取上清液，將上清液在480g的離心力作用下離心20分鐘，下面的沉淀為血小板，上清液為血漿，放入4℃冰箱冷凍備用。兩組均用鹽酸氯胺酮100mg/kg+鹽酸甲苯噻嗪25mg/kg腹腔注射將大鼠全身麻醉，采用改良Nystrom法后路壓迫大

5、鼠胸段脊髓。A組大鼠在脊髓損傷后立即在傷處滴入PRP、B組在脊髓損傷后立即在傷處滴入自體血漿，均浸泡5min后逐層縫合傷口。各只大鼠分別在術(shù)后進(jìn)行如下研究：①采用斜板試驗觀察大鼠后肢運動功能恢復(fù)情況；②BBB運動功能評分；③HE染色觀測傷段脊髓并計算殘存脊髓組織面積；④體感誘發(fā)電位(SSEP)；⑤免疫熒光雙標(biāo)法檢測兩大類神經(jīng)軸突(降鈣素基因相關(guān)蛋白(calcitonin gene-related peptide CGRP)陽性及5-羥色

6、胺能神經(jīng)纖維穿越膠質(zhì)瘢痕情況；⑥western-blot法檢測脊髓中神經(jīng)營養(yǎng)因子NGF、BDNF表達(dá)的變化。
　　[結(jié)果]①大鼠脊髓損傷后第7、14天，A組后肢運動功能評分明顯高于B組，兩者間差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。SSEP潛伏期及波幅值變化：術(shù)后第14天A組潛伏期12.37±1.689ms、波幅0.54±0.056mv；B組潛伏期14.14±1.553ms、波幅0.32±0.031mv，兩組差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.0

7、5)；②傷后第14天A組傷段殘存脊髓組織面積大于對照組(P<0.05)。脊髓損傷處遠(yuǎn)側(cè)端神經(jīng)軸突出現(xiàn)的平均百分比為：5-HT能神經(jīng)軸突A組40.2±4.98％、B組28.3±3.22％，CGRP能神經(jīng)軸突A組58.3±4.23％、B組43.2±3.26％，兩組差別有均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。CGRP組與5-HT組相比，兩對照組差別無顯著性(P>0.05，)，兩實驗組差別有統(tǒng)計學(xué)意義，CGRP組穿越情況明顯高于5-HT組(P<0.0