自體富血小板血漿對(duì)顆粒脂肪移植血運(yùn)重建的影響.pdf

1、背景：自體脂肪移植由于其組織來(lái)源豐富、取材簡(jiǎn)便、操作簡(jiǎn)單、充盈外形較好、無(wú)排斥反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)，被臨床上廣泛應(yīng)用，是修飾軟組織輪廓缺陷的良好填充材料。富血小板血漿(PRP)是自體血通過(guò)梯度離心得到的血小板濃縮物，其內(nèi)血小板含量豐富，能釋放豐富的生長(zhǎng)因子。很多研究已經(jīng)證實(shí)PRP中的生長(zhǎng)因子對(duì)軟組織和骨的愈合有促進(jìn)作用，但是目前還沒(méi)有PRP對(duì)脂肪移植后血運(yùn)重建影響的報(bào)道。
　　 目的：本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)建立裸鼠脂肪移植模型，將兔顆粒脂肪中加入

2、自體富血小板血漿混合移植，來(lái)探討富血小板血漿對(duì)顆粒脂肪移植后血運(yùn)重建的影響。
　　 方法：健康新西蘭大白兔6只各心臟采血25ml置于預(yù)選裝有EDTA抗凝劑的試管中，取3ml制備全血血漿，另取2ml用于全血血小板計(jì)數(shù)，其余20ml制備富血小板血漿。每管10ml置于2個(gè)離心管中，2500r/min離心10分鐘，吸上清、中間層及紅細(xì)胞下層1-2mm，移至另一離心管，搖勻。3200r/min離心8分鐘，最下層1ml即為PRP。取PRP0

3、.3ml進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)，余下移至含有凝血酶及10％氯化鈣混合物的管中，4℃冰箱過(guò)夜，待血凝塊充分收縮后，4500r/min離心8分鐘，取上清，-20℃保存?zhèn)溆?。同時(shí)無(wú)菌條件下取兔頸背部區(qū)脂肪墊，浸泡在PBS緩沖液中，清除外包膜、明顯的結(jié)締組織和肉眼可見(jiàn)的小血管，用剪刀將脂肪組織剪碎成1 mm3大小，再用生理鹽水反復(fù)沖洗后置入50ml離心管中靜置備用。24只雌雄不限的裸鼠，隨機(jī)分為4組，每組6只鼠隨機(jī)排序。每只裸鼠頸背部、背部左右兩側(cè)為注

4、射點(diǎn)，三點(diǎn)分別注射①、②或③組脂肪混合物。①實(shí)驗(yàn)組：顆粒脂肪0.3ml+明膠海綿125mm3+PRP0.1ml+生理鹽水0.1m1;②實(shí)驗(yàn)對(duì)照組：顆粒脂肪0.3ml+明膠海綿125mm3+全血血清0.1ml+生理鹽水0.1ml;③空白對(duì)照組：顆粒脂肪0.3ml+明膠海綿125mm3+生理鹽水0.2m1。在無(wú)菌操作臺(tái)上，固定裸鼠，消毒后在裸鼠背部標(biāo)記的三點(diǎn)分別做一長(zhǎng)約0.2cm切口，皮下鈍性剝離出直徑約1.5cm的腔隙，分別填入脂肪組織混

5、合物后縫合切口。術(shù)后1、2、4、12周分別處死1、2、3、4組各組6只裸鼠。取出移植物置于體積分?jǐn)?shù)10%多聚甲醛緩沖液中固定，經(jīng)脫水、透明、石蠟包埋。沿標(biāo)本縱軸制成4μm厚石蠟切片，每個(gè)標(biāo)本切片5張，一張做HE染色，4張做CD34免疫組化。對(duì)全血和PRP進(jìn)行人工計(jì)數(shù)，Weidner雙盲計(jì)數(shù)法計(jì)算每張組織切片的微血管密度，分析結(jié)果。所得數(shù)據(jù)SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)用x±s表示，并以P＜0.05為有顯著性差異。
　　

6、 結(jié)果：24只裸鼠均無(wú)感染或死亡。全血血小板計(jì)數(shù)為(380.3±50.6)×109/L，PRP血小板計(jì)數(shù)為(1744.2±599.6)×109/L，PRP血小板計(jì)數(shù)是全血的4.59倍。各個(gè)時(shí)相的PRP處理組微血管計(jì)數(shù)均高于全血血清組及生理鹽水組，其中1周和2周的差異有顯著性差異(P＜0.05)，4周和12周的差異無(wú)顯著意義(P＞0.05)。全血血清組與生理鹽水組各個(gè)時(shí)相差異均無(wú)顯著意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：富血小板血