自體富血小板血漿對顆粒脂肪移植血運(yùn)重建的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、背景:自體脂肪移植由于其組織來源豐富、取材簡便、操作簡單、充盈外形較好、無排斥反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn),被臨床上廣泛應(yīng)用,是修飾軟組織輪廓缺陷的良好填充材料。富血小板血漿(PRP)是自體血通過梯度離心得到的血小板濃縮物,其內(nèi)血小板含量豐富,能釋放豐富的生長因子。很多研究已經(jīng)證實(shí)PRP中的生長因子對軟組織和骨的愈合有促進(jìn)作用,但是目前還沒有PRP對脂肪移植后血運(yùn)重建影響的報道。
   目的:本實(shí)驗(yàn)旨在通過建立裸鼠脂肪移植模型,將兔顆粒脂肪中加入

2、自體富血小板血漿混合移植,來探討富血小板血漿對顆粒脂肪移植后血運(yùn)重建的影響。
   方法:健康新西蘭大白兔6只各心臟采血25ml置于預(yù)選裝有EDTA抗凝劑的試管中,取3ml制備全血血漿,另取2ml用于全血血小板計(jì)數(shù),其余20ml制備富血小板血漿。每管10ml置于2個離心管中,2500r/min離心10分鐘,吸上清、中間層及紅細(xì)胞下層1-2mm,移至另一離心管,搖勻。3200r/min離心8分鐘,最下層1ml即為PRP。取PRP0

3、.3ml進(jìn)行血小板計(jì)數(shù),余下移至含有凝血酶及10%氯化鈣混合物的管中,4℃冰箱過夜,待血凝塊充分收縮后,4500r/min離心8分鐘,取上清,-20℃保存?zhèn)溆?。同時無菌條件下取兔頸背部區(qū)脂肪墊,浸泡在PBS緩沖液中,清除外包膜、明顯的結(jié)締組織和肉眼可見的小血管,用剪刀將脂肪組織剪碎成1 mm3大小,再用生理鹽水反復(fù)沖洗后置入50ml離心管中靜置備用。24只雌雄不限的裸鼠,隨機(jī)分為4組,每組6只鼠隨機(jī)排序。每只裸鼠頸背部、背部左右兩側(cè)為注

4、射點(diǎn),三點(diǎn)分別注射①、②或③組脂肪混合物。①實(shí)驗(yàn)組:顆粒脂肪0.3ml+明膠海綿125mm3+PRP0.1ml+生理鹽水0.1m1;②實(shí)驗(yàn)對照組:顆粒脂肪0.3ml+明膠海綿125mm3+全血血清0.1ml+生理鹽水0.1ml;③空白對照組:顆粒脂肪0.3ml+明膠海綿125mm3+生理鹽水0.2m1。在無菌操作臺上,固定裸鼠,消毒后在裸鼠背部標(biāo)記的三點(diǎn)分別做一長約0.2cm切口,皮下鈍性剝離出直徑約1.5cm的腔隙,分別填入脂肪組織混

5、合物后縫合切口。術(shù)后1、2、4、12周分別處死1、2、3、4組各組6只裸鼠。取出移植物置于體積分?jǐn)?shù)10%多聚甲醛緩沖液中固定,經(jīng)脫水、透明、石蠟包埋。沿標(biāo)本縱軸制成4μm厚石蠟切片,每個標(biāo)本切片5張,一張做HE染色,4張做CD34免疫組化。對全血和PRP進(jìn)行人工計(jì)數(shù),Weidner雙盲計(jì)數(shù)法計(jì)算每張組織切片的微血管密度,分析結(jié)果。所得數(shù)據(jù)SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,數(shù)據(jù)用x±s表示,并以P<0.05為有顯著性差異。
  

6、 結(jié)果:24只裸鼠均無感染或死亡。全血血小板計(jì)數(shù)為(380.3±50.6)×109/L,PRP血小板計(jì)數(shù)為(1744.2±599.6)×109/L,PRP血小板計(jì)數(shù)是全血的4.59倍。各個時相的PRP處理組微血管計(jì)數(shù)均高于全血血清組及生理鹽水組,其中1周和2周的差異有顯著性差異(P<0.05),4周和12周的差異無顯著意義(P>0.05)。全血血清組與生理鹽水組各個時相差異均無顯著意義(P>0.05)。
   結(jié)論:富血小板血

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