富血小板血漿復合脂肪干細胞修復兔肌腱病變的實驗研究.pdf

1、目的:怎樣有效的治療肌腱疾病仍然是我們臨床工作所面臨的難題，脂肪來源干細胞(ADSCs)在不同的誘導條件下可具有多向分化成其它組織細胞的能力，因此ADSCs可作為修復細胞為其提供了新的治療方法，但ADSCs在臨床上用于治療肌腱疾病的作用機制還有待進一步研究。本課題通過構(gòu)建間接共培養(yǎng)模式，在體外觀察并檢測兔ADSCs與兔肌腱細胞間的特征變化，為ADSCs在肌腱病治療中的干細胞臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。實驗中還設(shè)置富血小板血漿(PRP)干預組對

2、照研究不同間接共培養(yǎng)環(huán)境對ADSCs分化誘導的機制。
　　 方法:采集新西蘭大白兔肌腱組織并采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)細胞，同時從兔脂肪組織中分離并培養(yǎng)ADSCs。采集兔耳部血液制備PRP，并將其激活后待用。選用孔徑為0.4(u)m的細胞共培養(yǎng)嵌盒和6孔板來構(gòu)建間接共培養(yǎng)模式，使得培養(yǎng)液相通但細胞卻不能直接接觸。將形態(tài)良好狀況穩(wěn)定的第3代(P3)兔肌腱細胞和兔ADSCs(P3)細胞應(yīng)用于此實驗模式。將同體肌腱細胞種植于內(nèi)室，將實驗組A

3、DSCs接種于間接共培養(yǎng)體系外室，與此同時設(shè)置肌腱細胞陽性對照組、干細胞對照組以及ADSCs加一定濃度PRP的干預組。分別在共培養(yǎng)后第3、7、14天時，提取內(nèi)、外室細胞進行觀察及相關(guān)檢測。分別利用光學顯微鏡和免疫組化染色技術(shù)，進行細胞形態(tài)學觀察和蛋白層面的檢測分析。統(tǒng)計MOD數(shù)據(jù)并計算Ⅰ型膠原和腱調(diào)蛋白(TNMD)在蛋白層面的表達情況，根據(jù)檢測的結(jié)果分析間接共培養(yǎng)環(huán)境對ADSCs誘導分化與細胞外基質(zhì)表達產(chǎn)生的影響。應(yīng)用前列腺素E2方法建

4、立肌腱病模型，并將復合PRP的兔ADSCs進行在體肌腱病模型部位處回植后觀察檢測并分析修復效果。
　　 結(jié)果:在體外成功分離、培養(yǎng)并檢測、鑒定兔脂肪干細胞及兔肌腱細胞特征。在共培養(yǎng)3天時，檢測內(nèi)外室細胞，各組ADSCs在免疫組化染色檢測中均未出現(xiàn)Ⅰ型膠原與腱調(diào)蛋白(TNMD)的陽性表達。在第7天時，單純間接共培養(yǎng)組的以上兩種蛋白在免疫組化染色方面顯示部分細胞出現(xiàn)弱陽性染色，其與PRP干預組之間比較無明顯差別。在第14天時，檢測結(jié)

5、果顯示單純組的干細胞在以上兩種蛋白的免疫組化染色呈現(xiàn)廣泛弱陽性染色，而PRP干預組呈更強程度的弱陽性染色。將各組的蛋白表達情況進行統(tǒng)計學分析，單純組干細胞的兩種蛋白表達程度顯著高于陰性的干細胞對照組但較肌腱細胞陽性對照組表達弱。另外，PRP干預組的表達情況優(yōu)于單純干細胞實驗組。將富血小板血漿復合ADSCs回植前列腺素E2-肌腱病模型，觀察并分析修復效果，其實驗數(shù)據(jù)、相關(guān)指標顯示實驗組肌腱病模型部位的修復效果優(yōu)于對照組。
　　 結(jié)