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文檔簡介
1、目的:從細(xì)胞水平和動物水平分別比較L-PRP和P-PRP對成骨相關(guān)細(xì)胞生物學(xué)行為、大鼠顱骨缺損修復(fù)和NF-κB通路的影響,探討去白細(xì)胞優(yōu)化PRP對骨修復(fù)的作用及其機(jī)制。
方法:
第一部分:分別使用不同離心參數(shù)制備PCP或P-PRP,檢測各種PCP和P-PRP的血細(xì)胞成分、血小板功能、生長因子濃度、炎癥因子濃度,并檢測各種P-PRP對HBMSC細(xì)胞增殖、活性和遷移的影響;
第二部分:分別制備L-PRP和P-P
2、RP,檢測兩者的白細(xì)胞、血小板、生長因子和炎癥因子濃度,并分析PRP細(xì)胞成分對細(xì)胞因子濃度的影響;
第三部分:使用10%FBS、L-PRP或P-PRP培養(yǎng)HBMSC和EaHy926后,檢測細(xì)胞增殖、活性、遷移,HBMSC成骨分化和EaHy926成管;
第四部分:使用10%FBS、L-PRP或P-PRP培養(yǎng)HBMSC和EaHy926后,檢測NF-κB p65核內(nèi)表達(dá)、COX-2和iNOS基因表達(dá)以及PGE2和NO合成;
3、
第五部分:構(gòu)建大鼠顱骨缺損模型,使用單純β-TCP或L-PRP、P-PRP預(yù)處理的β-TCP填充治療,并使用CAPE抑制NF-κB通路活化,通過Micro-CT、序列熒光標(biāo)記、組織學(xué)染色分析骨缺損修復(fù)。
結(jié)果:
第一部分:以160×g離心10 min繼之以250×g離心15 min的兩次離心法可以在幾乎完全去除紅細(xì)胞和白細(xì)胞的前提下,最大限度回收并富集血小板,同時保護(hù)血小板功能;進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),該方法制
4、備的P-PRP對于HBMSC體外增殖和遷移的促進(jìn)作用顯著優(yōu)于其他P-PRP;因此,該方法是制備P-PRP的最佳兩次離心法;
第二部分:L-PRP中血小板、PDGF-AB、TGF-β1和VEGF濃度與P-PRP相似而白細(xì)胞、IL-1β和TNF-α濃度則顯著高于P-PRP; PRP中血小板濃度僅與生長因子濃度正相關(guān)而白細(xì)胞濃度則僅與炎癥因子濃度正相關(guān);
第三部分:L-PRP和P-PRP均可以促進(jìn)HBMSC和EaHy926
5、增殖、活性、遷移,HBMSC成骨分化和EaHy926成管,但是P-PRP的效果顯著優(yōu)于L-PRP;
第四部分:L-PRP可以導(dǎo)致HBMSC和EaHy926中NF-κB p65核內(nèi)轉(zhuǎn)移,上調(diào)COX-2和iNOS的mRNA表達(dá)并促進(jìn)其產(chǎn)物PGE2和NO的合成;
第五部分:L-PRP和P-PRP均可以促進(jìn)大鼠顱骨缺損修復(fù),但是P-PRP療效更為顯著,而抑制NF-κB通路激活可以顯著提高L-PRP對大鼠顱骨缺損的療效。
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