自體富血小板血漿干預(yù)兔早期椎間盤退變的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的椎間盤退變(intervertebral disc degeneration，IDD)早期的生物學(xué)治療有望阻止甚至逆轉(zhuǎn)其病變過程。富血小板血漿(platelet-rich plasma，PRP)含多種生物活性因子，如PDGF、TGF-β，IGF-1、VEGF等，這些生物活性因子具有刺激椎間盤細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)合成代謝及抑制纖維環(huán)細(xì)胞凋亡等功能。本研究通過全纖維環(huán)針刺法制備椎間盤早期退變模型并予以自體PRP干預(yù)，觀察自體PRP對(duì)

2、早期椎間盤退變的干預(yù)效果。
　　方法取健康成年新西蘭大白兔45只，體重2.5-3.0kg，雌雄不限。于兔耳中央動(dòng)脈取血，采用Landesberg等的方法制備PRP，同時(shí)對(duì)全血及PRP行血小板計(jì)數(shù)。采用纖維壞針刺(L4/5、L5/6)的方法建立椎間盤退變模型，將所有兔子隨機(jī)分為3組(n=15)。實(shí)驗(yàn)組：在模型建立2周時(shí)將100μlPRP分別注入L4/5、L5/6椎間盤；對(duì)照組：在相同間隙注入100μl的PBS液。假手術(shù)組：僅分離暴露

3、椎間盤，不作任何處理。在模型建立2周時(shí)及干預(yù)后第1、2周，每組隨機(jī)取5只兔子行腰椎MRI、組織學(xué)及Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)檢查，并進(jìn)行兔腰椎MRI退變程度評(píng)分，HE染色形態(tài)學(xué)觀察及Ⅱ型膠原陽性積分光密度檢測(cè)。
　　結(jié)果血小板計(jì)數(shù)顯示兔PRP中血小板約為外周血的4.92倍。模型建立兩周時(shí)，和假手術(shù)組相比，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組腰椎手術(shù)節(jié)段椎間盤T2加權(quán)信號(hào)降低、變暗，組織學(xué)觀察示髓核細(xì)胞數(shù)量減少，基質(zhì)退行性變，免疫組織化學(xué)染色示Ⅱ型膠原陽性積分

4、光密度降低，顯示造模成功。PRP干預(yù)后第1、2周，同一時(shí)間點(diǎn)觀察，腰椎MRI顯示實(shí)驗(yàn)組退變程度及評(píng)分均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。干預(yù)后同一時(shí)間點(diǎn)觀察，對(duì)照組椎間盤結(jié)構(gòu)紊亂，髓核細(xì)胞數(shù)量明顯減少。而實(shí)驗(yàn)組髓核細(xì)胞數(shù)量及軟骨樣基質(zhì)多，基質(zhì)纖維化程度輕。和對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組Ⅱ型膠原的表達(dá)明顯增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組PRP干預(yù)前后多個(gè)時(shí)間點(diǎn)連續(xù)觀察，Ⅱ型膠原表達(dá)的變化不明顯，而對(duì)照組Ⅱ型膠原表達(dá)隨時(shí)間呈