兔ADSCs與PRP聯(lián)合對(duì)脂肪顆粒移植入裸鼠皮下后血運(yùn)重建的影響.pdf

1、背景:
　　 自體脂肪顆粒注射移植因?yàn)榫邆涔┰闯渥?、取材方便、操作?jiǎn)單、微創(chuàng)無(wú)痕、無(wú)供區(qū)畸形、有良好的組織相容性、手感自然、充盈外形好并能同時(shí)獲得瘦身塑體的效果等優(yōu)點(diǎn)，被國(guó)內(nèi)外整形美容外科領(lǐng)域青睞，是人體最理想、最具發(fā)展?jié)摿Φ能浗M織填充方法，而且脂肪組織最近又被發(fā)現(xiàn)是一種內(nèi)分泌組織，增加了其移植優(yōu)勢(shì)。但移植后脂肪細(xì)胞吸收率高(30％-70％)、液化、壞死等并發(fā)癥限制了其在臨床的應(yīng)用。富血小板血漿（platelet-richpla

2、sma，PRP）是將全血通過(guò)梯度離心得到的血小板濃縮物，能釋放豐富的生長(zhǎng)因子。很多研究已經(jīng)證實(shí)PRP中的生長(zhǎng)因子對(duì)軟組織和骨組織的愈合有促進(jìn)作用，且對(duì)脂肪來(lái)源干細(xì)胞(adipose-derivedstemcells，ADSCs)的增殖有促進(jìn)作用。ADSCs有多向分化潛能，且具有來(lái)源廣泛、取材方便、組織損傷小、可分泌多種生長(zhǎng)因子等優(yōu)勢(shì)，使其成為近年來(lái)干細(xì)胞研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。
　　 目的:
　　 本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)建立裸鼠模型，將

3、兔ADSCs、PRP聯(lián)合加入自體脂肪顆粒中混合移植，來(lái)探討兩者聯(lián)合對(duì)移植后血運(yùn)重建的影響。
　　 方法:
　　 1.取3月齡新西蘭大白兔頸背部區(qū)脂肪墊，采用Ⅰ型膠原酶消化法體外分離培養(yǎng)兔ADSCs，觀察細(xì)胞形態(tài)特征。
　　 2.取第3代兔ADSCs進(jìn)行成脂、成骨誘導(dǎo)分化，油紅O、茜素紅染色鑒定，確定兔ADSCs具備多向分化潛能。
　　 3.新西蘭大白兔心臟抽血，二次離心法制備PRP，血小板計(jì)數(shù)。
　

4、　 4.MTT法檢測(cè)PRP、全血漿、對(duì)照組在不同時(shí)段(24h、48h、72h)對(duì)體外培養(yǎng)兔ADSCs的增殖的影響。
　　 5.制備脂肪顆粒、明膠海綿顆粒。28只裸鼠隨機(jī)編號(hào)，按隨機(jī)表將其分成4組，每組7只。每只鼠后背取5點(diǎn):左上、右上、左下、右下、正中（每?jī)牲c(diǎn)間距大于2cm），將5點(diǎn)按照隨機(jī)表排列。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)分為五組:①脂肪顆粒+ADSCs+PRP+明膠海綿;②脂肪顆粒+ADSCs+生理鹽水+明膠海綿;③脂肪顆粒+PRP+生理鹽

5、水+明膠海綿;④脂肪顆粒+全血漿+生理鹽水+明膠海綿;⑤脂肪顆粒+生理鹽水+明膠海綿。將各組移植入裸鼠皮下。
　　 6.分別于7d、14d、30d、90d取材，制作石蠟切片，HE染色法觀察對(duì)比組織形態(tài)，免疫組化法檢測(cè)血管數(shù)。
　　 結(jié)果:
　　 1.ADSCs原代培養(yǎng)的細(xì)胞接種24h后，可見(jiàn)少量較大的橢圓形、類圓形細(xì)胞貼壁，未貼壁的細(xì)胞大部分為圓形的紅細(xì)胞及筋膜雜質(zhì)。48h后首次換液，大多數(shù)細(xì)胞貼壁，呈梭形、多角

6、形、類圓形等。3d后可見(jiàn)部分細(xì)胞已貼壁伸展，呈長(zhǎng)梭形，核居中、可見(jiàn)核分裂相。7d后可見(jiàn)細(xì)胞80％-90％融合，細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形成纖維細(xì)胞樣生長(zhǎng)，集體呈旋渦狀、魚群狀生長(zhǎng)。此時(shí)進(jìn)行胰酶消化傳代，4-6h即可貼壁，細(xì)胞形態(tài)仍呈長(zhǎng)梭形，且貼壁速度和生長(zhǎng)速度較原代細(xì)胞明顯增快，連續(xù)傳代19代細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯改變。成脂誘導(dǎo)2W后油紅O染色呈陽(yáng)性結(jié)果，成骨誘導(dǎo)3W后茜素紅染色呈陽(yáng)性結(jié)果，對(duì)照組均為陰性結(jié)果。
　　 2.全血血小板計(jì)數(shù)結(jié)果:(330

7、.2±148.8)×109/L，PRP血小板計(jì)數(shù)結(jié)果:(1398.3±888.5)×109/L，PRP血小板計(jì)數(shù)是全血的4.23倍。
　　 3.細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)MTT法顯示PRP組在24h、48h、72h時(shí)對(duì)ADSCs的增值較對(duì)照組增殖明顯，與全血漿組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p≤0.05)。
　　 4.與其他各組相比，各時(shí)間段內(nèi)脂肪顆粒+ADSCs+PRP+明膠海綿組血管數(shù)均明顯增多，單獨(dú)ADSCs或PRP組相對(duì)較多，全血漿組、生理鹽