健脾益氣方藥對(duì)人胃癌裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：胃癌是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，總體5年生存率不及30％。目前的治療方法，包括根治性手術(shù)切除、化療、放療及其他綜合治療等，均未能有效提高腫瘤病人的治愈率和生存率，且大多數(shù)病人預(yù)后很差。胃癌經(jīng)常在癌癥晚期才診斷，約有40％-50％患者診斷時(shí)已是局部晚期?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)和臨床研究表明中醫(yī)脾虛證與胃癌的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系，且胃癌病人經(jīng)過(guò)治療后還會(huì)加重脾虛，如此惡性循環(huán)。本研究建立人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型，觀察健脾益氣方藥及其聯(lián)合細(xì)胞周期

2、特異性化療藥氟尿嘧啶(5-Fu)對(duì)移植瘤裸鼠治療后的一般情況、皮下移植瘤的生長(zhǎng)、腫瘤細(xì)胞周期情況及凋亡率等的影響。 方法： 1、動(dòng)物模型的建立用含10％標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基在37℃，5％CO2條件下體外培養(yǎng)人胃癌細(xì)胞株BGC-803，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)。收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，建立裸鼠皮下移植瘤模型，作鼠間傳代至第6代。將32只裸鼠麻醉，用瘤株建立動(dòng)物模型。 2、裸鼠分組 將32只裸鼠隨機(jī)分為陰性

3、對(duì)照(生理鹽水)組，陽(yáng)性對(duì)照(化療藥5-Fu)組，中藥(健脾益氣方藥)組和聯(lián)合用藥(5-Fu+健脾益氣方藥)組。 3.裸鼠一般情況觀察監(jiān)測(cè)裸鼠體質(zhì)量變化，同時(shí)觀察裸鼠攝食、攝水和精神狀態(tài)等變化。 4、腫瘤生長(zhǎng)的大體指標(biāo)測(cè)量裸鼠腫瘤的整體短徑、長(zhǎng)徑，計(jì)算瘤體體積；繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線；測(cè)量瘤質(zhì)量，計(jì)算腫瘤抑制率。 5、腫瘤組織學(xué)觀察處死裸鼠后，肉眼觀察瘤組織；取小塊組織常規(guī)石蠟包埋切片，光鏡下觀察。 6、免疫功

4、能檢測(cè)處死裸鼠，取脾臟稱重；眼球取血約0.15ml，檢測(cè)NK細(xì)胞百分比。 7、流式細(xì)胞儀檢測(cè)取部分腫瘤組織，制備成單細(xì)胞懸液，PI染色后上流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡率的測(cè)定。 結(jié)果： 1、裸鼠一般情況觀察化療藥組裸鼠隨治療進(jìn)行逐漸出現(xiàn)精神萎靡，攝食、攝水減少。治療前各組裸鼠體質(zhì)量無(wú)顯著性差異。治療結(jié)束時(shí)，生理鹽水組、化療藥組、健脾益氣方藥組、聯(lián)合用藥組體質(zhì)量分別為 18.86±0.94g、16.16±1.3

5、7g、19.40±2.27g、16.38±1.54g。與生理鹽水組比較，化療藥組、聯(lián)合用藥組裸鼠體質(zhì)量減小；與化療藥組相比，中藥組、聯(lián)合用藥組裸鼠體質(zhì)量增加。 2、腫瘤生長(zhǎng)分析2.1 裸鼠瘤塊體積(V=長(zhǎng)徑×短徑2cm3/2)的情況治療前各組腫瘤體積無(wú)差別。治療結(jié)束時(shí)，生理鹽水組、化療藥組、健脾益氣方藥組、聯(lián)合用藥組腫瘤體積分別為2.22±0.45cm3、1.66±0.60cm3、2.13±0.39cm3、1.08±0.42cm

6、3。與生理鹽水組比較，化療藥組、中藥組、聯(lián)合用藥組腫瘤體積減小；與化療藥組相比，聯(lián)合用藥組裸鼠腫瘤體積減小。 2.2 裸鼠瘤質(zhì)量的情況治療結(jié)束時(shí)，生理鹽水組、化療藥組、健脾益氣方藥組、聯(lián)合用藥組裸鼠瘤質(zhì)量分別為2.26±0.23g、1.34±0.50g、1.96±0.81g、1.00±0.52g。與生理鹽水組比較，化療藥組、聯(lián)合用藥組裸鼠瘤質(zhì)量減小?；熕幗M、健脾益氣方藥組、聯(lián)合用藥組的抑瘤率分別為40.71％、13.27％、5

7、5.75％。 3、腫瘤組織學(xué)觀察各組腫瘤組織病理切片HE染色均可見(jiàn)大量呈巢狀排列的癌細(xì)胞；中央可見(jiàn)癌細(xì)胞壞死，且陽(yáng)性對(duì)照組、聯(lián)合用藥組的壞死區(qū)域較陰性對(duì)照組、中藥組為廣泛。 4、對(duì)裸鼠免疫功能的影響4.1 裸鼠脾臟的質(zhì)量四組裸鼠脾臟質(zhì)量之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4.2 裸鼠NK細(xì)胞百分比治療結(jié)束時(shí)，生理鹽水組、化療藥組、健脾益氣方藥組、聯(lián)合用藥組裸鼠NK細(xì)胞百分比分別為5.60±0.26、4.16±0.59、6.4

8、2±0.24、6.02±0.23。與生理鹽水組比較，化療藥組、聯(lián)合用藥組裸鼠NK細(xì)胞百分比增加；與化療藥組比較，健脾益氣方藥組裸鼠NK細(xì)胞百分比增加。 5、流式細(xì)胞儀檢測(cè)5.1 G0/G1期、S期、G2/M期腫瘤細(xì)胞百分比對(duì)G2/M期腫瘤細(xì)胞百分比來(lái)說(shuō)，四組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)G0/G1、S期腫瘤細(xì)胞百分比來(lái)說(shuō)，與生理鹽水組比較，聯(lián)合用藥組增加。 5.2 腫瘤細(xì)胞凋亡率治療結(jié)束時(shí)，生理鹽水組、化療藥組、健脾益氣方藥組、聯(lián)

9、合用藥組裸鼠腫瘤細(xì)胞凋亡率分別為13.86±3.32、19.07±7.85、15.19±3.56、19.99±4.45。與生理鹽水組比較，化療藥組、聯(lián)合用藥組裸鼠腫瘤細(xì)胞凋亡率增加。 結(jié)論： 1、健脾益氣方藥可以改善腫瘤患者治療后的一般狀態(tài)。 2、健脾益氣方藥可增強(qiáng)化療藥的療效。 3、健脾益氣方藥對(duì)裸鼠皮下移植人胃癌BGC-803細(xì)胞的抑制增殖作用的機(jī)制可能與增強(qiáng)免疫功能，調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞周期，促進(jìn)G1、S期