糖原磷酸化酶同工酶BB在小型豬心肌缺血模型變化趨勢(shì)分析.pdf

1、背景：心血管并發(fā)癥，特別是圍手術(shù)期心肌梗死是非心臟手術(shù)后死亡的主要原因。隨著外科手術(shù)量不斷增加，圍手術(shù)期心肌損傷在臨床實(shí)踐中越來(lái)越常見(jiàn)。因?yàn)槌^(guò)80％的圍手術(shù)期心肌損傷患者并沒(méi)有明顯的臨床癥狀，大部分圍手術(shù)期心肌損傷并沒(méi)有明確診斷處理，此外它不明顯的表現(xiàn)導(dǎo)致醫(yī)生和大眾對(duì)其認(rèn)識(shí)有限。盡管?chē)中g(shù)期心肌損傷在很大程度上是沒(méi)有癥狀的，它使得手術(shù)后30天患者死亡率增加近10倍。手術(shù)中患者處于鎮(zhèn)靜睡眠狀態(tài)，在很大程度上掩蓋了缺血性心肌損害的臨床癥狀

2、，而手術(shù)所致軀體不適也會(huì)影響我們對(duì)心血管癥狀的甄別。因此加強(qiáng)圍術(shù)期心血管系統(tǒng)監(jiān)護(hù)，檢測(cè)心肌缺血的早期敏感指標(biāo)，可以提高心血管事件檢出率以及評(píng)估冠狀動(dòng)脈再灌注水平。
　　目的：生物標(biāo)志物作為常規(guī)臨床檢驗(yàn)的一部分可以很容易地檢測(cè)。糖原磷酸化酶同工酶腦型（glycogen phosphorylaseBB,GPBB）為糖原分解的關(guān)鍵酶,在心肌細(xì)胞肌漿網(wǎng)構(gòu)成糖原分解復(fù)合物,該復(fù)合物對(duì)缺血引起的糖原分解特別敏感，使其構(gòu)成發(fā)生改變,形成可溶性G

3、PBB,透過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入血液，適于臨床急診測(cè)定。本研究通過(guò)分析GPBB在小型豬急性心肌缺血模型中動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)，特別是3小時(shí)之內(nèi)的連續(xù)血清濃度變化，評(píng)估GPBB在心肌損傷中的診斷價(jià)值。
　　方法：健康雄性巴馬系香豬（體重25±5kg）外科手術(shù)結(jié)扎冠狀動(dòng)脈，制作小型豬心肌損傷壞死模型。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了缺血再灌注組和缺血無(wú)灌注組。GPBB主要存在于與腦和心肌組織，肌肉組織為糖原磷酸化酶同工酶肌型（glycogen phosphorylase,

4、GPMM），因此開(kāi)胸手術(shù)冠狀動(dòng)脈結(jié)扎之后不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)到的GPBB是由心肌細(xì)胞釋放，而排除手術(shù)引起的肌肉損傷所致，所以本實(shí)驗(yàn)沒(méi)有設(shè)置假手術(shù)組，而是在冠狀動(dòng)脈結(jié)扎前設(shè)置一次采血，記作0h，便于結(jié)扎后各時(shí)間點(diǎn)與其對(duì)照。選取巴馬系香豬30頭，隨機(jī)分為兩組，缺血1小時(shí)再灌注6小時(shí)（I1h-R6h）組20頭，缺血7小時(shí)（I7h）組10頭。在全身麻醉下，監(jiān)測(cè)血壓、五導(dǎo)聯(lián)心電圖、脈搏氧飽和度，打開(kāi)胸腔，充分暴露心臟，結(jié)扎左前降支中下三分之一處。術(shù)中I1

5、h-R6h組結(jié)扎1小時(shí)松開(kāi)結(jié)扎線，開(kāi)放血流，I7h組持續(xù)結(jié)扎，同時(shí)觀察心電圖變化。小型豬生命體征平穩(wěn)時(shí)，逐層關(guān)閉胸腔，麻醉復(fù)蘇。開(kāi)胸后，結(jié)扎前采血一次，記作0h，結(jié)扎時(shí)刻之后0.5h、1h、2h、3h、5h和7h共計(jì)7個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行靜脈采血，每次3-5ml，離心取上清并立即放入-80℃冰箱凍存，血清送往醫(yī)院檢驗(yàn)科由固定檢驗(yàn)醫(yī)師檢測(cè) cTnI濃度，用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測(cè)定 GPBB濃度。7h后，麻醉處死動(dòng)物，立即取出心臟。用冰冷的

6、磷酸鹽緩沖液（PhosphateBufferedSaline，PBS）沖洗干凈，放入-40℃冰箱中冰凍1 h，待心肌變硬后取出，垂直于心臟長(zhǎng)軸，自心尖向心底切成2mm厚的切片，浸沒(méi)于1%的2，3，5-氯化三苯基四氮唑( triphenyltetrazolium chloride，TTC)磷酸鹽緩沖液中，放入37℃恒溫水浴箱30 min后取出，數(shù)碼相機(jī)拍照。
　　結(jié)果：⑴成功建立小型豬心肌缺血模型。I1h-R6h組20頭，2頭死于術(shù)

7、中室顫，1頭死于氣道梗阻導(dǎo)致的窒息缺氧。I7h組10頭，1頭術(shù)中室顫，1頭術(shù)后死亡。⑵心電圖改變，結(jié)扎后ST段下降，繼而上升，呈現(xiàn)典型心肌缺血表現(xiàn)。⑶TTC染色后，正常心肌呈玫瑰紅色，梗死心肌呈蒼白色。驗(yàn)證心梗模型建立成功。⑷兩組小型豬血清 cTnI濃度在不同時(shí)相變化趨勢(shì)不同（P<0.001）。兩組之間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.001）。和0h相比，I1h-R6h組2h肌鈣蛋白明顯升高（P<0.05）， I7h組3h后緩慢升高，5h有統(tǒng)

8、計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。⑸兩組小型豬血清GPBB濃度在不同時(shí)相變化趨勢(shì)不同（P<0.001）。兩組之間比較沒(méi)有差異（P>0.05）。和0h相比，I1h-R6h組1h明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），2h有所下降，3h再次升高，之后下降至正常水平。其峰值濃度的時(shí)間周期狹窄。I7h組變化趨勢(shì)和I1h-R6h組類似。
　　結(jié)論：①在小型豬心肌缺血模型中，血清中GPBB濃度在缺血1小時(shí)后即明顯升高，早于cTnI。②持續(xù)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)肌鈣