一種治療骨性關(guān)節(jié)炎的復(fù)方制劑的研究與開發(fā).pdf

1、目的：考察腺苷蛋氨酸配伍美洛昔康對碘乙酸誘導(dǎo)的大鼠膝骨關(guān)節(jié)炎的影響，研究對大鼠誘導(dǎo)性骨關(guān)節(jié)炎的治療作用并探討其相關(guān)作用機(jī)制；觀察腺苷蛋氨酸、美洛昔康及其兩者配伍對多重疼痛的影響，并探討其作用機(jī)制；考察腺苷蛋氨酸的吸濕性、美洛昔康增溶劑的選擇、以及復(fù)方顆粒綜合流動(dòng)性、成型性、粒徑分布等指標(biāo)，確定治療骨性關(guān)節(jié)炎的復(fù)方腸溶膠囊的處方組成和制備工藝，制備該復(fù)方腸溶膠囊；通過對處方臨界相對濕度的測定，為制劑生產(chǎn)過程中生產(chǎn)環(huán)境濕度的控制提供參考；進(jìn)

2、行三批放大試驗(yàn)，驗(yàn)證制劑工藝的可行性；建立治療骨關(guān)節(jié)炎復(fù)方腸溶膠囊的質(zhì)量控制方法。
　　方法：
　　（1）腺苷蛋氨酸配伍美洛昔康對膝骨關(guān)節(jié)炎治療作用的研究：昆明種小鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)1w后，按體重匹配隨機(jī)分為7組，通過小鼠熱板法、扭體法實(shí)驗(yàn)，觀察腺苷蛋氨酸、美洛昔康及其兩者配伍對小鼠疼痛的影響。Wistar大鼠，普通飼料喂養(yǎng)1w后，隨機(jī)分為7組，灌胃給藥21 d后，以3％戊巴比妥鈉腹腔注射淺麻，單側(cè)膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射碘乙酸鈉（MIA

3、）誘導(dǎo)大鼠 OA模型，評價(jià)不同時(shí)間點(diǎn)大鼠平均關(guān)節(jié)炎指數(shù)（MAI）；光鏡觀察大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨和滑膜的組織病理學(xué)改變；ELISA法檢測血清和關(guān)節(jié)液中一氧化氮（NO）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）含量及血清中軟骨寡聚基質(zhì)蛋白（COMP）、基質(zhì)金屬蛋白酶-3（MMP-3）含量。
　?。?）治療骨關(guān)節(jié)炎復(fù)方腸溶膠囊制備工藝的研究：以微晶纖維素、乳糖、微粉硅膠、β-環(huán)糊精、淀粉為輔料制粒，以吸濕性為指標(biāo)篩選腺苷

4、蛋氨酸抗吸濕性輔料的種類及用量；以泊洛沙姆188（F68）、聚乙烯吡咯烷酮k30（PVP-k30)為輔料，以溶出度為指標(biāo)篩選美洛昔康增溶劑的種類及用量；以膠囊內(nèi)容物的流動(dòng)性、粒徑分布、成型性為指標(biāo)，篩選復(fù)方最佳的制備工藝，最終確定治療骨關(guān)節(jié)炎復(fù)方腸溶膠囊的處方組成。按照確定的制備工藝流程，生產(chǎn)3批，進(jìn)行放大研究。按照2010版《中國藥典》的方法，對3批樣品進(jìn)行常規(guī)項(xiàng)檢查。
　?。?）治療骨關(guān)節(jié)炎復(fù)方腸溶膠囊質(zhì)量控制方法的研究：采用

5、化學(xué)法、紫外可見分光光度法、高效液相色譜法對復(fù)方中腺苷蛋氨酸和美洛昔康進(jìn)行鑒別；采用HPLC法進(jìn)行復(fù)方中腺苷蛋氨酸和美洛昔康的含量測定；進(jìn)行方法學(xué)考察；采用槳法在pH為1.2和6.8的溶出介質(zhì)中進(jìn)行藥物體外釋放度考察，最終建立治療骨關(guān)節(jié)炎復(fù)方腸溶膠囊的質(zhì)量控制方法。
　　結(jié)果：
　?。?）腺苷蛋氨酸配伍美洛昔康對膝骨關(guān)節(jié)炎治療作用的影響：腺苷蛋氨酸配伍美洛昔康不同配比均可不同程度延長小鼠熱板反應(yīng)和扭體反應(yīng)潛伏期，其中，高劑量

6、組能顯著抑制熱刺激和化學(xué)刺激所致的疼痛。腺苷蛋氨酸、美洛昔康及兩者配伍均可不同程度減輕OA大鼠膝關(guān)節(jié)炎癥癥狀；改善膝關(guān)節(jié)軟骨和滑膜的病變；降低大鼠血清和關(guān)節(jié)液中IL-1β、TNF-α、NO含量；降低大鼠血清中COMP、MMP-3含量，對MIA所致的骨關(guān)節(jié)炎有明顯的治療作用。
　　（2）治療骨關(guān)節(jié)炎復(fù)方腸溶膠囊制備工藝的研究：最終選定微晶纖維素和乳糖為腺苷蛋氨酸的抗吸濕輔料，用量配比為SAMe∶MCC∶乳糖為14∶5∶2；選定泊洛沙

7、姆188為美洛昔康的增溶劑，用量配比為MLX:F68為5∶3；制備工藝流程：F68溶解于適量無水乙醇，置于相應(yīng)MLX固體粉末中，充分?jǐn)嚢瑁?0℃水浴蒸干無水乙醇，真空干燥器干燥，研磨，過100目篩備用，以MCC、乳糖、SAMe原料粉過100目，按比例稱量、混合，以98%乙醇制軟材，24目制粒，減壓干燥，24目整粒，添加0.15%微粉硅膠助流，填充于腸溶膠囊殼中。制備的藥物顆粒具有良好的流動(dòng)性和成型性，粒徑分布均勻，臨界相對濕度為78.5

8、%，裝量差異及含量均勻度檢查均符合要求。
　　（3）治療骨關(guān)節(jié)炎復(fù)方腸溶膠囊質(zhì)量控制方法的研究：采用HPLC法測定復(fù)方腸溶膠囊中腺苷蛋氨酸和美洛昔康的含量，方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果表明，方法穩(wěn)定、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。體外釋放度試驗(yàn)表明，三批樣品中腺苷蛋氨酸和美洛昔康2h內(nèi)在pH為1.2的溶出介質(zhì)均無溶出，45min內(nèi)在pH為6.8的溶出介質(zhì)中的釋放量均符合相關(guān)規(guī)定。
　　結(jié)論:腺苷蛋氨酸配伍美洛昔康對熱刺激和化學(xué)刺激所致的疼痛有效。腺苷蛋

9、氨酸能在一定程度延緩和抑制OA大鼠軟骨退行性改變和滑膜炎癥，具有防治骨關(guān)節(jié)炎的作用；配伍美洛昔康后可進(jìn)一步增強(qiáng)療效，其作用隨腺苷蛋氨酸劑量的增加而增強(qiáng)；其作用機(jī)制可能與降低血清中COMP、MMP-3含量從而降低關(guān)節(jié)軟骨的破壞、改善軟骨和滑膜病變、減少血清和關(guān)節(jié)液中主要炎癥細(xì)胞因子有關(guān)。治療骨關(guān)節(jié)炎的復(fù)方腸溶膠囊制備工藝穩(wěn)定可行，質(zhì)量穩(wěn)定可控，且體外溶出試驗(yàn)顯示具有良好的腸溶性能，適合于后期工業(yè)化生產(chǎn)。所建立的高效液相色譜方法準(zhǔn)確、穩(wěn)定、