一種治療骨性關節(jié)炎的復方制劑的研究與開發(fā).pdf

1、目的：考察腺苷蛋氨酸配伍美洛昔康對碘乙酸誘導的大鼠膝骨關節(jié)炎的影響，研究對大鼠誘導性骨關節(jié)炎的治療作用并探討其相關作用機制；觀察腺苷蛋氨酸、美洛昔康及其兩者配伍對多重疼痛的影響，并探討其作用機制；考察腺苷蛋氨酸的吸濕性、美洛昔康增溶劑的選擇、以及復方顆粒綜合流動性、成型性、粒徑分布等指標，確定治療骨性關節(jié)炎的復方腸溶膠囊的處方組成和制備工藝，制備該復方腸溶膠囊；通過對處方臨界相對濕度的測定，為制劑生產(chǎn)過程中生產(chǎn)環(huán)境濕度的控制提供參考；進

2、行三批放大試驗，驗證制劑工藝的可行性；建立治療骨關節(jié)炎復方腸溶膠囊的質量控制方法。
　　方法：
　?。?）腺苷蛋氨酸配伍美洛昔康對膝骨關節(jié)炎治療作用的研究：昆明種小鼠，適應性喂養(yǎng)1w后，按體重匹配隨機分為7組，通過小鼠熱板法、扭體法實驗，觀察腺苷蛋氨酸、美洛昔康及其兩者配伍對小鼠疼痛的影響。Wistar大鼠，普通飼料喂養(yǎng)1w后，隨機分為7組，灌胃給藥21 d后，以3％戊巴比妥鈉腹腔注射淺麻，單側膝關節(jié)腔內(nèi)注射碘乙酸鈉（MIA

3、）誘導大鼠 OA模型，評價不同時間點大鼠平均關節(jié)炎指數(shù)（MAI）；光鏡觀察大鼠膝關節(jié)軟骨和滑膜的組織病理學改變；ELISA法檢測血清和關節(jié)液中一氧化氮（NO）、白細胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）含量及血清中軟骨寡聚基質蛋白（COMP）、基質金屬蛋白酶-3（MMP-3）含量。
　?。?）治療骨關節(jié)炎復方腸溶膠囊制備工藝的研究：以微晶纖維素、乳糖、微粉硅膠、β-環(huán)糊精、淀粉為輔料制粒，以吸濕性為指標篩選腺苷

4、蛋氨酸抗吸濕性輔料的種類及用量；以泊洛沙姆188（F68）、聚乙烯吡咯烷酮k30（PVP-k30)為輔料，以溶出度為指標篩選美洛昔康增溶劑的種類及用量；以膠囊內(nèi)容物的流動性、粒徑分布、成型性為指標，篩選復方最佳的制備工藝，最終確定治療骨關節(jié)炎復方腸溶膠囊的處方組成。按照確定的制備工藝流程，生產(chǎn)3批，進行放大研究。按照2010版《中國藥典》的方法，對3批樣品進行常規(guī)項檢查。
　?。?）治療骨關節(jié)炎復方腸溶膠囊質量控制方法的研究：采用

5、化學法、紫外可見分光光度法、高效液相色譜法對復方中腺苷蛋氨酸和美洛昔康進行鑒別；采用HPLC法進行復方中腺苷蛋氨酸和美洛昔康的含量測定；進行方法學考察；采用槳法在pH為1.2和6.8的溶出介質中進行藥物體外釋放度考察，最終建立治療骨關節(jié)炎復方腸溶膠囊的質量控制方法。
　　結果：
　　（1）腺苷蛋氨酸配伍美洛昔康對膝骨關節(jié)炎治療作用的影響：腺苷蛋氨酸配伍美洛昔康不同配比均可不同程度延長小鼠熱板反應和扭體反應潛伏期，其中，高劑量

6、組能顯著抑制熱刺激和化學刺激所致的疼痛。腺苷蛋氨酸、美洛昔康及兩者配伍均可不同程度減輕OA大鼠膝關節(jié)炎癥癥狀；改善膝關節(jié)軟骨和滑膜的病變；降低大鼠血清和關節(jié)液中IL-1β、TNF-α、NO含量；降低大鼠血清中COMP、MMP-3含量，對MIA所致的骨關節(jié)炎有明顯的治療作用。
　?。?）治療骨關節(jié)炎復方腸溶膠囊制備工藝的研究：最終選定微晶纖維素和乳糖為腺苷蛋氨酸的抗吸濕輔料，用量配比為SAMe∶MCC∶乳糖為14∶5∶2；選定泊洛沙

7、姆188為美洛昔康的增溶劑，用量配比為MLX:F68為5∶3；制備工藝流程：F68溶解于適量無水乙醇，置于相應MLX固體粉末中，充分攪拌，40℃水浴蒸干無水乙醇，真空干燥器干燥，研磨，過100目篩備用，以MCC、乳糖、SAMe原料粉過100目，按比例稱量、混合，以98%乙醇制軟材，24目制粒，減壓干燥，24目整粒，添加0.15%微粉硅膠助流，填充于腸溶膠囊殼中。制備的藥物顆粒具有良好的流動性和成型性，粒徑分布均勻，臨界相對濕度為78.5

8、%，裝量差異及含量均勻度檢查均符合要求。
　　（3）治療骨關節(jié)炎復方腸溶膠囊質量控制方法的研究：采用HPLC法測定復方腸溶膠囊中腺苷蛋氨酸和美洛昔康的含量，方法學驗證結果表明，方法穩(wěn)定、準確、重現(xiàn)性好。體外釋放度試驗表明，三批樣品中腺苷蛋氨酸和美洛昔康2h內(nèi)在pH為1.2的溶出介質均無溶出，45min內(nèi)在pH為6.8的溶出介質中的釋放量均符合相關規(guī)定。
　　結論:腺苷蛋氨酸配伍美洛昔康對熱刺激和化學刺激所致的疼痛有效。腺苷蛋

9、氨酸能在一定程度延緩和抑制OA大鼠軟骨退行性改變和滑膜炎癥，具有防治骨關節(jié)炎的作用；配伍美洛昔康后可進一步增強療效，其作用隨腺苷蛋氨酸劑量的增加而增強；其作用機制可能與降低血清中COMP、MMP-3含量從而降低關節(jié)軟骨的破壞、改善軟骨和滑膜病變、減少血清和關節(jié)液中主要炎癥細胞因子有關。治療骨關節(jié)炎的復方腸溶膠囊制備工藝穩(wěn)定可行，質量穩(wěn)定可控，且體外溶出試驗顯示具有良好的腸溶性能，適合于后期工業(yè)化生產(chǎn)。所建立的高效液相色譜方法準確、穩(wěn)定、