丹酚酸組分結構特征解析及整體生物藥劑學性質的表征.pdf

1、中藥中已知或未知的化學成分有數(shù)十乃至成百上千種，各化學成分的含量和生物活性存在差別，進行中藥組分及其制劑的評價時，不能兼顧每一個成分，如何在中藥眾多的化學成分中選擇指標性成分用以研究組分的整體性質，進而反映中藥的整體性特點，這是中藥制劑研究的當務之急。隨著現(xiàn)代科學技術的不斷發(fā)展，中藥制劑的研究也漸漸深入到組分層次。本課題基于中醫(yī)藥整體觀，以丹酚酸組分為研究模型，初步探討了以中藥組分為基礎的中藥制劑研究新思路。主要研究內容如下:
　

2、　第一章對中藥組分生物藥劑學分類系統(tǒng)的構建以及丹酚酸組分化學成分和防治腦缺血藥理作用的研究進展做了整體闡述。在中醫(yī)藥理論的指導下，從中藥物質基礎研究的發(fā)展歷程、有限個代表性成分論“N”、表征組分整體性質的數(shù)理模型、組分生物藥劑學分類系統(tǒng)的構建等方面探討了中藥制劑研究的新模式。并對丹酚酸組分的化學成分、丹參防治腦缺血疾病的作用機制及研究進展這兩個方面做了深入的總結和闡述。
　　第二章首先模擬體內血腦屏障，建立體外血腦屏障(BBB)模

3、型，并運用該模型從體外的角度快速篩選出丹酚酸組分中可能作用于中樞神經系統(tǒng)疾病的藥效成分。結果表明利用該模型從丹酚酸組分中篩選出至少有6種成分能夠穿越BBB模型，這6中成分被確認為丹參素、原兒茶酸、咖啡酸、異阿魏酸、紫草酸、迷迭香酸。其次采用人腦微血管內皮細胞的缺糖缺氧(OGD)模型優(yōu)化篩選丹酚酸組分中代表性成分。對細胞形態(tài)學觀察表明，丹酚酸組分及各有效成分組合均能有效減輕缺氧對細胞形態(tài)的損傷，其中迷迭香酸+丹參素+原兒茶酸+異阿魏酸+咖

4、啡酸（主成分A）組和迷迭香酸+丹參素+原兒茶酸+異阿魏酸+咖啡酸+紫草酸（主成分B）組對細胞保護作用較好;相關生化因子的測定結果表明，丹酚酸組分及主成分B均能減輕氧化損傷(T-SOD、MDA、GSH-PX和CAT)，緩解細胞的缺氧損傷，降低炎癥因子(TNF-α、IL-6、sICAM-1)的表達從而達到保護腦微血管內皮細胞，緩解缺血后神經功能的損傷的目的，且無顯著差異(P＞0.05)。對細胞中MMP-9、VEGF蛋白的表達及MMP-9、V

5、EGF mRNA的表達結果表明，主成分B組與丹酚酸組分相比無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　第三章采用MCAO模型驗證丹酚酸組分的代表性成分。結果表明丹酚酸組分及主成分B組均具有保護腦缺血損傷的功效，且無顯著差異:即可顯著減輕腦缺血大鼠神經功能缺損、減少腦梗死面積;改善氧化指標:升高SOD、CAT、GSH-PX，降低MDA含量;提高VEGF、TIMP-1表達，降低p-p38MPAK、TLR-4、NFkBp65、Caspase-3

6、、 MMP-2、MMP-9表達;下調bax表達，上調bcl-2表達，抑制了細胞的凋亡;降低NMDAR1 mRNA表達及增加VEGF mRNA的表達。
　　第四章采用HPLC解析丹酚酸組分代表性成分的結構。最終確定丹參素、原兒茶酸、咖啡酸、異阿魏酸、紫草酸、迷迭香酸在組分中的含量分別為12.47％、3.98％、3.01％、6.05％、7.36％和20.96％，相互之間的量比關系丹參素∶原兒茶酸∶咖啡酸∶異阿魏酸∶迷迭香酸∶紫草酸為4

7、.14∶1.32∶1.00∶2.01∶6.93∶2.45。
　　第五章測定了前文所篩選得到的代表性成分的平衡溶解度、表觀油水分配系數(shù)和Caco-2細胞滲透性等性質值，并運用數(shù)學模型對它們的性質值進行相似性分析和進一步整合表征。結果顯示，丹酚酸組分的平衡溶解度最大值為28.1271 mg·mL-1，最小值為6.20384mg·mL-1，組分油水分配系數(shù)LogP最大值是1.387，最小值是于0.037，Caco-2細胞的表觀通透系數(shù)P