白藜蘆醇和熱量限制對(duì)衰老大鼠長(zhǎng)壽基因SIRT1作用機(jī)制的比較研究.pdf

1、目的：白藜蘆醇是許多植物中存在的一種天然抗毒素，大量研究發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇可以通過抗氧化和激活 SIRT1基因等有效防止或者延緩很多老年相關(guān)疾病的發(fā)生和發(fā)展。熱量限制也可以通過促進(jìn)SIRT1的表達(dá)等來延緩衰老。對(duì)于兩者延緩衰老的作用及機(jī)制分述者眾多，但對(duì)兩者的作用進(jìn)行比較研究卻鮮少，本文通過比較白藜蘆醇和熱量限制延緩衰老的作用機(jī)制，探討兩者之間是否存在相同或者相近的作用機(jī)制，以及白藜蘆醇是否可以作為熱量限制的最佳擬效劑，以期為臨床延緩衰老及防

2、治老年病提供科學(xué)有效的參考依據(jù)及方法指導(dǎo)。
　　方法：SPF級(jí)雄性Wistar大鼠50只，體重200±10g，隨機(jī)分成五組：正常組、模型組、熱量限制組、白藜蘆醇低劑量組、白藜蘆醇高劑量組。模型組、白藜蘆醇低劑量組、白藜蘆醇高劑量組、熱量限制組采用每只大鼠D-半乳糖250mg/kg/d腹腔注射建立衰老模型，造模同時(shí)白藜蘆醇低劑量組，白藜蘆醇高劑量組分別給予白藜蘆醇100mg/kg/d/只,200mg/kg/d/只灌胃，正常組，模型組

3、，白藜蘆醇低劑量組，白藜蘆醇高劑量組進(jìn)食量按照100g/kg/d/只給予食物，熱量限制組食物為60％×100g/kg/d/只，實(shí)驗(yàn)連續(xù)6周。實(shí)驗(yàn)期間對(duì)大鼠精神、毛色、活動(dòng)等一般狀態(tài)進(jìn)行觀察；各組每四天稱量一次體重，進(jìn)行體重變化率的比較；Morris水迷宮試驗(yàn)，測(cè)試實(shí)驗(yàn)大鼠行為學(xué)改變；檢測(cè)肝臟和腦組織中抗氧化相關(guān)指標(biāo)：超氧化物歧化酶（SOD），丙二醛（MDA）和總抗氧化能力（T-AOC）等；酶聯(lián)免疫標(biāo)記法對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠端粒酶活性進(jìn)行測(cè)定；采用

4、免疫組化方法對(duì)SIRT1轉(zhuǎn)錄水平重要調(diào)節(jié)因子p53和FOXO3a進(jìn)行檢測(cè)；采用RT-PCR法檢測(cè)大鼠長(zhǎng)壽基因SIRT1、p53、FOXO3amRNA的表達(dá)情況；采用Western Blot對(duì)SIRT1轉(zhuǎn)錄后水平的p53、FOXO3a、HuR（ELAVL1）、RPS19BP1、DBC1等蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。
　　結(jié)果：（1）一般狀態(tài)觀察結(jié)果：正常組大鼠飲食、行動(dòng)、精神狀態(tài)良好；與正常組比較，模型組則精神不振，扎堆，毛色暗淡粗糙，漸有脫

5、毛現(xiàn)象，反應(yīng)遲鈍，活動(dòng)少；白藜蘆醇低劑量組和高劑量組大鼠精神狀態(tài)良好，食欲正常，反應(yīng)靈敏，活動(dòng)多，毛色光亮柔順，皮膚有彈性；熱量限制組精神較為亢奮，飲食、反應(yīng)、活動(dòng)狀態(tài)與白藜蘆醇低、高劑量組無明顯差異。
　　（2）體重變化率：對(duì)各組、各時(shí)間點(diǎn)大鼠體重變化率方差分析結(jié)果顯示：熱量限制組較其他各組體重增加緩慢，有顯著性差異（P<0.05），白藜蘆醇低、高劑量組體重增長(zhǎng)趨勢(shì)較正常組弱。
　?。?）行為學(xué)實(shí)驗(yàn)：白藜蘆醇低、高劑量組、

6、熱量限制組大鼠逃避潛伏期縮短，游泳速度加快，穿越目標(biāo)象限的次數(shù)增加，白藜蘆醇高劑量組明顯優(yōu)于熱量限制組（P<0.05），白藜蘆醇低劑量組與熱量限制組比較無顯著差異（P>0.05）。
　?。?）肝臟組織和腦組織抗氧化指標(biāo)：與正常組比較，模型組大鼠肝臟組織中SOD活力、T-AOC活力顯著降低（P<0.05），MDA含量顯著增加（P<0.05），白藜蘆醇高劑量組相較于熱量限制組 SOD活性顯著增加， T-AOC能力也顯著增加，MDA含量

7、顯著減少（P<0.05）。與正常組比較，模型組大鼠腦組織中SOD活力、T-AOC能力顯著降低（P<0.01），MDA含量顯著增加（P<0.01），白藜蘆醇高劑量組較熱量限制組SOD活性顯著增加，T-AOC能力也顯著增加，MDA含量顯著減少（P<0.05）。
　?。?）腦組織中端粒酶活性測(cè)定：與模型組比較，正常組端粒酶活性明顯增高（P<0.01），熱量限制組較白藜蘆醇低劑量組端粒酶活性明顯增高（P<0.05），與白藜蘆醇高劑量組比較

8、無顯著差異（P>0.05）。
　　（6）RT-PCR檢測(cè)SIRT1mRNA、p53mRNA和FOXO3amRNA的相對(duì)表達(dá)量：肝臟組織中，熱量限制組SIRT1mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于白藜蘆醇低劑量組，有顯著性差異（P<0.05），熱量限制組SIRT1mRNA相對(duì)表達(dá)量與白藜蘆醇高劑量組比較,無顯著差異（P>0.05），白藜蘆醇低劑量組 p53mRNA相對(duì)表達(dá)量與熱量限制組比較，無顯著差異（P>0.05），白藜蘆醇高劑量組p53m

9、RNA相對(duì)表達(dá)量低于熱量限制組，有顯著性差異（P<0.05），熱量限制組 FOXO3amRNA相對(duì)表達(dá)量與白藜蘆醇高劑量組比較無顯著差異（P>0.05），熱量限制組FOXO3amRNA相對(duì)表達(dá)量較白藜蘆醇低劑量組明顯增加，有顯著性差異（P<0.05）；腦組織中，白藜蘆醇低、高劑量組SIRT1mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于熱量限制組，有顯著性差異（P<0.05），白藜蘆醇低劑量組 p53mRNA相對(duì)表達(dá)量與熱量限制組比較無顯著差異（P>0.05

10、），白藜蘆醇高劑量組p53mRNA相對(duì)表達(dá)量低于熱量限制組，有顯著性差異（P<0.05），白藜蘆醇低、高劑量組FOXO3amRNA相對(duì)表達(dá)量與熱量限制組比較，無顯著性差異（P>0.05）。
　　（7）Western Blot檢測(cè)腦組織中SIRT1轉(zhuǎn)錄后水平p53、FOXO3a、RPS19BP1、HuR（ELAVL1）和 DBC1蛋白的表達(dá)：p53蛋白水平：白藜蘆醇低劑量組較熱量限制組p53蛋白表達(dá)量增加，白藜蘆醇高劑量組與熱量限制

11、組比較 p53蛋白表達(dá)量無顯著差異；FOXO3a蛋白水平：白藜蘆醇低劑量組FOXO3a蛋白表達(dá)量比熱量限制組減少，白藜蘆醇高劑量組FOXO3a蛋白表達(dá)量與熱量限制組比較無顯著差異；RPS19BP1蛋白水平：白藜蘆醇低劑量組 RPS19BP1表達(dá)量較熱量限制組減少，白藜蘆醇高劑量組RPS19BP1表達(dá)量與熱量限制組比較無顯著差異；HuR蛋白水平：白藜蘆醇高劑量組HuR蛋白表達(dá)量較熱量限制組增多，無顯著差異，白藜蘆醇低劑量組 HuR蛋白表達(dá)

12、量較熱量限制組減少，無顯著差異；DBC1蛋白水平：白藜蘆醇高劑量組DBC1蛋白表達(dá)量較熱量限制組明顯減少，白藜蘆醇低劑量組DBC1蛋白表達(dá)量與熱量限制組比較無顯著差異。
　　結(jié)論：白藜蘆醇高劑量組比熱量限制組具有更好的改善大鼠學(xué)習(xí)記憶能力、增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力的作用，也可以在一定程度上提高衰老大鼠端粒酶活性。通過分子水平進(jìn)行機(jī)制比較說明，白藜蘆醇和熱量限制均可促進(jìn)SIRT1、FOXO3a基因的表達(dá)量，降低p53基因的表達(dá)量，可以促進(jìn)