新生大鼠急性高氧肺損傷肺組織中SIRT1、TNF-α的蛋白表達(dá)及白藜蘆醇的干預(yù)作用.pdf

1、目的:
　　1.研究新生大鼠急高氧性肺損傷；
　　2.觀察新生大鼠急性高氧肺損傷時肺組織中SIRT1、TNF-α蛋白的表達(dá)變化及白藜蘆醇對二者表達(dá)的影響，并初步探討白藜蘆醇對急性高氧肺損傷的保護(hù)作用。
　　方法：將108只出生滿48小時的新生SD大鼠（雌雄不限），體重9-10g，按照隨機(jī)原則分為三組：I組--空氣組（空氣+二甲基亞砜溶液，n=36）；II組--高氧組（高氧+二甲基亞砜溶液，n=36）；III組--白藜蘆

2、醇干預(yù)組（高氧+白藜蘆醇溶液，n=36）；
　　I組新生大鼠置于常壓空氣中飼養(yǎng)，II組、III組新生大鼠置于氧濃度維持在90-95％的自制氧箱中飼養(yǎng)，時長均為7天。I組與II組于實(shí)驗(yàn)第一天起定時腹腔注射（100%二甲基亞砜，即DMSO100ul，0.9%生理鹽水1.9ml）5ml/kg.次，每日一次。III組于實(shí)驗(yàn)第一天起定時腹腔注射白藜蘆醇50mg/kg，即（分析純白藜蘆醇20mg，100%DMSO100ul，0.9%生理鹽水1

3、.9ml）5ml/kg.次，每日一次。
　　每組動物按實(shí)驗(yàn)時間點(diǎn)分為1天、3天、7天三個亞組，每組于各實(shí)驗(yàn)時間點(diǎn)分別隨機(jī)選取12只實(shí)驗(yàn)大鼠，麻醉處死后取材并完成以下指標(biāo)的檢測：
　?。?）肺泡灌洗液中總蛋白的含量；
　?。?）肺濕/干重之比值（W/D）：選取左肺，稱其濕重和干重，算出肺濕/干重比；
　?。?）觀察肺組織病理學(xué)情況：選取部分肺組織對其進(jìn)行病理切片，以觀察肺組織的病理改變；
　　（4）肺組織SI

4、RT1及TNF-α蛋白含量測定：選取右下肺，制成肺組織勻漿并提取蛋白，采用蛋白印記法對其蛋白含量分別加以測定。
　　結(jié)果：
　　1.各組實(shí)驗(yàn)動物一般情況觀察：I組中各實(shí)驗(yàn)動物精神反應(yīng)佳，皮毛光澤，飲食正常，活動靈活，體重漲勢良好。II組中各實(shí)驗(yàn)動物高氧暴露第1天，反應(yīng)好，唇色紅潤，脫離氧氣后無呼吸困難，第3天起出現(xiàn)精神反應(yīng)差，飲食減少，呼吸稍快，隨著吸氧時間延長，到第7天時，出現(xiàn)明顯的精神萎靡，皮毛無光澤，少食少動，脫離氧氣

5、后煩躁不安，呼吸頻率加快，鼻唇發(fā)紺，體重增長緩慢。III組的實(shí)驗(yàn)動物一般情況較II組實(shí)驗(yàn)動物有所改善。
　　2.肺組織病理學(xué)改變：I組新生大鼠隨著日齡的增加，肺逐漸發(fā)育成熟，肺泡大小逐漸趨于一致，肺泡間隔逐漸變薄，肺泡毛細(xì)血管豐富，無炎癥滲出和出血。II組實(shí)驗(yàn)動物于高氧暴露1天時可見肺泡數(shù)量較多，結(jié)構(gòu)仍較完整，肺泡腔內(nèi)出現(xiàn)少許紅細(xì)胞，肺泡壁增厚；3天后可見明顯肺組織炎性改變，肺毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血，肺泡腔擴(kuò)大，腔內(nèi)可見壞死細(xì)胞、炎性

6、細(xì)胞滲出、紅細(xì)胞，肺泡間隔輕度增寬且水腫，肺間質(zhì)細(xì)胞增多；7天時炎癥反應(yīng)進(jìn)一步加重，肺實(shí)質(zhì)結(jié)構(gòu)紊亂，肺泡結(jié)構(gòu)簡單，肺泡腔大小不一，部分肺泡融合，肺泡數(shù)目明顯減少，肺泡內(nèi)可見大量的紅細(xì)胞，肺泡間隔有較多炎性細(xì)胞浸潤。III組的肺組織病理改變較II組明顯減輕，主要表現(xiàn)為炎性細(xì)胞、紅細(xì)胞滲出減少。
　　3.肺組織濕/干重比（W/D）：
　　(1)組內(nèi)比較：在各個時間點(diǎn)，I、III組動物肺組織W/D無明顯差異（P＞0.05）；II組

7、動物隨著高氧暴露時間延長，W/D逐漸升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　(2)組間比較：實(shí)驗(yàn)1天時，各組實(shí)驗(yàn)動物的肺組織W/D無明顯差異（P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)3天、7天時，II組實(shí)驗(yàn)動物的肺組織W/D較I組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），III組實(shí)驗(yàn)動物的肺組織W/D較I組無明顯升高，與II組相比則明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4.支氣管肺泡灌洗液（BLAF）中總蛋白（TP）含量測定：
　　(1)

8、組內(nèi)比較：在各個時間點(diǎn)，I、III組動物肺組織BLAF中TP含量無顯差異（P＞0.05）；II組動物隨著高氧暴露時間延長，W/D均逐漸上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　(2)組間比較：實(shí)驗(yàn)1天時，三組實(shí)驗(yàn)動物BLAF中TP含量無明顯差異（P＞0.05）;而實(shí)驗(yàn)3天及7天時，II組實(shí)驗(yàn)動物的BLAF中TP含量明顯高于Ⅰ組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;III組的BLAF中TP含量較I組無明顯升高，與II組相比則明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)

9、意義（P＜0.05）。
　　5.肺組織中SIRT1及TNF-α蛋白表達(dá)水平的變化：western blotting檢測結(jié)果表明：
　　(1)組內(nèi)比較：在各個時間點(diǎn)，I組動物肺組織 SIRT1、TNF-α表達(dá)無顯差異（P＞0.05）。II、III組動物隨著高氧暴露時間延長，肺組織SIRT1表達(dá)逐漸下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；肺組織TNF-α表達(dá)逐漸上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　(2)組間比較：各組實(shí)驗(yàn)動物肺組織中的SIRT1

10、及TNF-α的蛋白表達(dá)水平在實(shí)驗(yàn)第1天無顯著差異（P＞0.05）；實(shí)驗(yàn)第3天及第7天時，II組SIRT1的蛋白表達(dá)水平較Ⅰ組明顯下降（P＜0.05），TNF-α的蛋白表達(dá)水平較Ⅰ組明顯升高（P＜0.05）；III組肺組織中的SIRT1的蛋白表達(dá)較Ⅰ組下降（P＜0.05），但明顯高于II組（P＜0.05），TNF-α的蛋白表達(dá)較Ⅰ組升高（P＜0.05），但明顯低于II組（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.暴露于高濃度氧氣可

11、導(dǎo)致新生大鼠急性肺損傷，且隨著暴露時間的延長，肺損傷進(jìn)行性加重。主要的病理表現(xiàn)為肺組織局部充血水腫、炎癥滲出、肺泡內(nèi)出血、肺泡腔擴(kuò)大、肺泡數(shù)目減少、肺組織結(jié)構(gòu)紊亂等。
　　2.新生大鼠急性高氧肺損傷時，肺組織中TNF-α蛋白表達(dá)水平明顯升高，且且高氧暴露越久，升高越明顯；而SIRT1蛋白表達(dá)水平明顯下降，且高氧暴露越久，降低越明顯。提示SIRT1及TNF-α可能參與了高氧肺損傷的發(fā)病。
　　3.白藜蘆醇在急性肺損傷后可能通過