高氧暴露對(duì)新生大鼠肺組織中VEGF、β-catenin、DKK-1蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：①創(chuàng)立新生大鼠高氧肺損傷的動(dòng)物模型；②觀察和比較高氧性肺損傷時(shí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肺組織病理學(xué)變化，以及通過(guò)檢測(cè)高濃度氧氣所致新生大鼠肺損傷中 DKK1、β-連環(huán)蛋白（β-catenin）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的表達(dá)，從而探討DKK1、β-連環(huán)蛋白（β-catenin）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）在急性高氧性肺損傷發(fā)病機(jī)制中的作用；③探討DKK-1作為Wnt信號(hào)通路中的關(guān)鍵的抑制因子,能否通過(guò)其減少高濃度氧氣對(duì)肺組織的損傷，為臨床治

2、療高氧性肺損傷提供理論依據(jù)。
　　方法：將36只出生一天內(nèi)的新生Sprague Dawley（SD）大鼠（雌雄均可用）隨機(jī)分為兩組：Ⅰ組：空氣組（對(duì)照組，n=18）；Ⅱ組：高氧組（高氧組，n=18）。新生大鼠置于空氣中環(huán)境中喂養(yǎng)。Ⅱ組新生大鼠置于氧濃度保持在95％左右環(huán)境中喂養(yǎng)。每組按實(shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)分為1天、3天、7天三個(gè)亞組，并于各測(cè)試時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物6只，取材檢測(cè)以下指標(biāo)：取左肺稱取濕重，然后烘干后，稱取干重，計(jì)算肺濕/干重比

3、值；右上肺置于福爾馬林內(nèi)，擇期行病理切片后，觀察肺組織病理變化；肺組織VEGF，β-catenin，DKK-1蛋白含量測(cè)定：在肺組織內(nèi)提取對(duì)應(yīng)的蛋白，使用Western Blotting方法測(cè)定其含量。
　　結(jié)果：⑴各組測(cè)試動(dòng)物一般情況觀察：I組中的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)食狀態(tài)好，生長(zhǎng)發(fā)育正常。Ⅱ組中的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物逐漸出現(xiàn)癥狀，表現(xiàn)為皮毛顏色干枯，進(jìn)食減少，脫氧后躁動(dòng)，呼吸困難明顯，口唇周?chē)冏希m無(wú)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡，但整體情況差。⑵肺組織病理學(xué)改變

4、：I組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物各時(shí)間點(diǎn)肺組織肺泡正常，肺泡大小一致，肺泡壁厚，肺泡腔內(nèi)無(wú)液體滲出。Ⅱ組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在高氧暴露3天后，肺泡腔擴(kuò)大，肺泡大小不一致，肺泡壁開(kāi)始變薄，肺泡數(shù)目減少。7天后可見(jiàn)肺組織水腫，肺泡壁明顯變薄、肺泡腔擴(kuò)大、結(jié)構(gòu)不完整、肺泡數(shù)目明顯減少。⑶肺組織濕/干重比（W/D）：在測(cè)試第1天、3天、7天時(shí)，Ⅱ組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肺組織W/D較I組有升高（P＜0.05）。⑷肺組織中VEGF，β-catenin，DKK-1蛋白表達(dá)程度的變化：在實(shí)驗(yàn)第

5、1天，II組與I組相比，肺組織VEGF蛋白表達(dá)程度升高（P＜0.05）；在實(shí)驗(yàn)第3、7天時(shí)，II組與I組相比，肺組織VEGF蛋白表達(dá)程度下降明顯（P＜0.05）；在實(shí)驗(yàn)第1天，II組與I組相比，肺組織β-catenin表達(dá)程度未見(jiàn)明顯變化（P＞0.05）；在實(shí)驗(yàn)第3天，II組與I組相比，肺組織β-catenin蛋白表達(dá)下降（P＜0.05），實(shí)驗(yàn)第7天時(shí)，II組與I組相比，肺組織β-catenin蛋白表達(dá)程度下降明顯（P＜0.01）；在實(shí)

6、驗(yàn)第7天時(shí)，II組與I組相比，肺組織DKK-1的蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05）；在實(shí)驗(yàn)第1天、3天時(shí)，II組與I組相比，肺組織DKK-1的蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯變化（P＞0.05）。
　　結(jié)論：①高氧暴露下的新生大鼠出現(xiàn)肺損傷，伴隨著在高氧環(huán)境下的時(shí)間延長(zhǎng)，肺損傷逐漸嚴(yán)重。主要病理表現(xiàn)為肺組織顯著發(fā)育不良，肺泡壁變薄，肺泡腔擴(kuò)大，結(jié)構(gòu)不完整，肺泡數(shù)目減少，肺微血管發(fā)育受阻等。②高氧肺損傷時(shí)，VEGF、β-catenin的蛋白表達(dá)水平