COX-2抑制劑對高氧新生大鼠肺組織保護(hù)機(jī)制和肺組織AQP-1、NF-κB表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　1.建立新生Sprague Dawley(SD)大鼠高氧肺損傷動物模型，觀察新生大鼠肺組織結(jié)構(gòu)的病理改變；
　　2.比較高氧肺損傷時(shí)水通道蛋白-1（AQP-1）、核轉(zhuǎn)錄因子kappa B(NF-κB)的表達(dá)變化趨勢，探討AQP-1、NF-κB在肺損傷發(fā)病機(jī)制中的作用；
　　3.探討環(huán)氧合酶2（COX-2）抑制劑塞來昔布干預(yù)后是否對高氧誘導(dǎo)的肺組織損傷有保護(hù)作用，為防治高氧環(huán)境下的肺損傷提供依據(jù)。
　　

2、方法：
　　1.建立新生大鼠高氧肺損傷的動物模型：將出生一天內(nèi)的新生SD大鼠（雌雄不限）105只隨機(jī)分為三組（n=35）：Ⅰ組：空氣組（空氣+腹腔注射DMSO）；II組：高氧組（85%氧氣+腹腔注射DMSO）；Ⅲ組：塞來昔布干預(yù)組（85%氧氣+腹腔注射塞來昔布）。
　　2.Ⅰ組新生大鼠自由呼吸空氣飼養(yǎng)，每天固定時(shí)間點(diǎn)注射DMSO（5ml/kg）。Ⅱ組、Ⅲ組新生大鼠置于密閉85%高氧箱中飼養(yǎng)。Ⅱ組于實(shí)驗(yàn)第一天起每天固定時(shí)間點(diǎn)腹

3、腔注射DMSO（5ml/kg）。Ⅲ組于實(shí)驗(yàn)第一天起同一時(shí)間點(diǎn)腹腔注射塞來昔布5mg/kg。
　　3.分別在實(shí)驗(yàn)第3d、7d、14d各組隨機(jī)抓取8只大鼠并處死，取肺組織標(biāo)本檢測下列指標(biāo)：
　?。?）右下肺組織行蘇木精-伊紅（HE）染色觀察其病理學(xué)變化；
　?。?）右中上肺組織一部分應(yīng)用免疫組化染色法觀察肺組織中AQP-1、NF-κB含量，另一部分應(yīng)用凋亡染色法觀察肺組織細(xì)胞生長發(fā)育情況。
　　結(jié)果：
　　1.

4、各組大鼠實(shí)驗(yàn)期間一般情況：Ⅰ組（空氣組）中的實(shí)驗(yàn)大鼠反應(yīng)良好，生長發(fā)育正常，無死亡現(xiàn)象。Ⅱ組（高氧組）中的實(shí)驗(yàn)大鼠逐漸出現(xiàn)癥狀，表現(xiàn)為精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，活動量明顯減少，脫氧后呼吸困難，煩躁不安明顯，實(shí)驗(yàn)期間死亡4只。Ⅲ組（干預(yù)組）中的實(shí)驗(yàn)大鼠一般情況較高氧組明顯改善，實(shí)驗(yàn)期間死亡1只。
　　2.肺組織病理學(xué)改變：Ⅰ組（空氣組）實(shí)驗(yàn)大鼠各時(shí)間點(diǎn)肺組織肺泡大小均一，結(jié)構(gòu)完整，肺泡腔內(nèi)未見滲液及炎癥細(xì)胞浸潤。Ⅱ組（高氧組）實(shí)驗(yàn)大鼠在高

5、氧暴露3d后出現(xiàn)液性滲出，可見有肺毛細(xì)血管擴(kuò)張，肺泡腔擴(kuò)大，腔內(nèi)可見炎性細(xì)胞浸潤。7d后肺泡腔內(nèi)可見出血，液體滲出較多，炎癥細(xì)胞浸潤較3d時(shí)明顯加重，肺組織結(jié)構(gòu)紊亂，部分肺泡細(xì)胞破壞并出現(xiàn)肺大泡。14d時(shí)肺組織結(jié)構(gòu)破壞更為明顯，肺泡—毛細(xì)血管膜、肺間隔明顯增厚，成纖維細(xì)胞增生出現(xiàn)纖維化表現(xiàn)。Ⅲ組（干預(yù)組）各時(shí)相肺組織形態(tài)學(xué)改變均較高氧組明顯改善。
　　3.肺組織AQP-1、NF-κB蛋白的表達(dá)：各時(shí)相點(diǎn)高氧組（Ⅱ組）實(shí)驗(yàn)大鼠同空氣

6、組（Ⅰ組）實(shí)驗(yàn)大鼠相比，肺組織AQP-1蛋白表達(dá)水平明顯下降（P＜0.01），NF-κB蛋白表達(dá)水平明顯升高（P＜0.01），塞來昔布干預(yù)組（Ⅲ組）實(shí)驗(yàn)大鼠肺組織AQP-1蛋白表達(dá)水平較高氧組（Ⅱ組）明顯增加（P＜0.01），NF-κB蛋白表達(dá)較高氧組（Ⅱ組）明顯減少（P＜0.01）。
　　4.肺組織在空氣組、高氧組、干預(yù)組肺泡細(xì)胞凋亡的變化：在各時(shí)相點(diǎn)，高氧組（Ⅱ組）實(shí)驗(yàn)大鼠同空氣組（Ⅰ組）實(shí)驗(yàn)大鼠相比，肺組織細(xì)胞凋亡數(shù)明顯增加

7、（P＜0.01），塞來昔布干預(yù)組（Ⅲ組）實(shí)驗(yàn)大鼠肺組織細(xì)胞凋亡數(shù)較高氧組（Ⅱ組）明顯減少（P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.長時(shí)間吸入高濃度氧氣可致新生大鼠發(fā)生肺損傷，表現(xiàn)為肺泡內(nèi)炎性液體滲出及炎癥細(xì)胞浸潤；肺組織結(jié)構(gòu)紊亂，肺泡-毛細(xì)血管膜、肺間隔明顯增厚，成纖維細(xì)胞增生等。
　　2.高氧肺損傷時(shí)，AQP-1蛋白表達(dá)水平較空氣組明顯下降，提示在高氧肺損傷時(shí)可能有肺泡上皮細(xì)胞膜受損或功能障礙；NF-κB蛋白表達(dá)水平較