急性肺栓塞大鼠肺部炎癥反應(yīng)的機(jī)制及白藜蘆醇的干預(yù)作用.pdf

1、目的： 1.研究大鼠急性肺栓塞后肺部炎癥反應(yīng)的機(jī)制； 2.研究中藥單體白藜蘆醇對(duì)急性肺栓塞大鼠肺部炎癥反應(yīng)的干預(yù)作用。 方法： 96只SD大鼠按完全隨機(jī)設(shè)計(jì)分為正常對(duì)照組(N組)，溶劑對(duì)照組(D組)，血栓栓塞組(T組)，白藜蘆醇+栓塞組(TR組)，各組分1h、4h、8h3個(gè)時(shí)間點(diǎn)組，分別為N1、N4、N8組，D1、D4、D8組，T1、T4、T8組，TR1、TR4、TR8組，每組8只。采用大鼠自體血凝栓回輸

2、體內(nèi)(導(dǎo)管經(jīng)右頸靜脈插至肺動(dòng)脈)復(fù)制急性肺血栓栓塞模型。所有各組大鼠均接受手術(shù)及插管處理。N組于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)大鼠尾靜脈注入等量生理鹽水：D組大鼠尾靜脈注射等量1％二甲基亞砜(DMSO)溶液(DMSO用生理鹽水稀釋成1％的DMSO溶液)；T組大鼠輸入血栓復(fù)制急性肺栓塞模型；TR組大鼠在輸入血栓復(fù)制急性肺栓塞模型后，立即予尾靜脈注射白藜蘆醇溶液10mg/kg(白藜蘆醇溶于1％的DMSO溶液)。按改良右心導(dǎo)管法制備急性肺栓塞模型。各組大鼠右心房

3、取血(10ml注射器右心房緩慢取血5-8ml)室溫靜置10min后4000rm/min、4℃離心10min分離血漿，用ELISA法檢測(cè)大鼠血漿單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的變化；取大鼠左肺中下葉用10％多聚甲醛液固定，石蠟包埋切片，用于大鼠肺組織HE染色、免疫組化法檢測(cè)MCP-1、激光共聚焦顯微鏡下采用免疫熒光法檢測(cè)磷酸化p38的表達(dá)；取大鼠右肺及左下肺裝入DEPC水處理的冷凍管-70℃保存，用于R

4、T-PCR檢測(cè)肺組織MCP-1mRNA及westernblot檢測(cè)肺組織磷酸化p38的變化。 結(jié)果： 1.肺組織HE染色結(jié)果顯示：N、D組各時(shí)間點(diǎn)組大鼠肺內(nèi)炎癥細(xì)胞數(shù)較少；急性肺栓塞組各時(shí)間點(diǎn)組大鼠肺內(nèi)可見(jiàn)大量炎癥細(xì)胞；TR1組大鼠肺組織內(nèi)炎癥細(xì)胞數(shù)較T1組無(wú)明顯差異(P＞0.05)，TR4組、TR8組大鼠肺組織內(nèi)炎癥細(xì)胞數(shù)分別較T4組、T8h組為少(P＜0.05)。 2.血漿ELISA檢測(cè)MCP-1和TNF-α

5、結(jié)果顯示：(1)MCF-1檢測(cè)結(jié)果：T組、TR組各時(shí)間點(diǎn)大鼠血漿MCP-1分別較N、D組各時(shí)間點(diǎn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。(2)TNF-α檢測(cè)結(jié)果：T1組大鼠血漿TNF-α較N1、D1組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，T4、T8組大鼠血漿TNF-α分別較N、D組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，T1、T4、T8組間TNF-α表達(dá)量隨時(shí)間而增高；TR1組大鼠血漿TNF-α的表達(dá)量較T1組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，TR4、TR8

6、組大鼠血漿TNF-α的表達(dá)量分別較T4、T8組為低(P＜0.05)。 3.免疫組化和免疫熒光檢測(cè)肺組織石蠟切片顯示：急性肺血栓栓塞組大鼠肺組織MCP-1、磷酸化p38明顯表達(dá)。 4.WesternBlot檢測(cè)肺組織磷酸化p38顯示：T組各時(shí)間點(diǎn)大鼠肺組織中磷酸化p38的量分別較N、D組各時(shí)間點(diǎn)為高(P＜0.05)，T組各時(shí)間點(diǎn)大鼠肺組織中磷酸化p38的量與時(shí)間成正相關(guān)；TR1組大鼠肺組織中磷酸化p38的量較T1組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)

7、意義(P＞0.05)，TR4、TR8組大鼠肺組織中磷酸化p38的量分別較T4、T8組為低(P＜0.05)。 5.RT-PCR檢測(cè)肺組織MCP-1mRNA顯示：T組各時(shí)間點(diǎn)大鼠肺組織中MCP-1mRNA的量分別較N、D組各時(shí)間點(diǎn)為高(P＜0.05)，T組各時(shí)間點(diǎn)大鼠肺組織中MCP-1mRNA的量與時(shí)間成正相關(guān)；TR1組大鼠肺組織中MCP-1mRNA的量較T1組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，TR4、TR8組大鼠肺組織中MCP-1mR

8、NA的量分別較T4、T8組為低(P＜0.05)。 結(jié)論： 1.急性肺栓塞可引起大鼠肺部炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和炎癥介質(zhì)釋放； 2.急性肺栓塞大鼠可能通過(guò)激活肺組織p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上調(diào)MCP-1的表達(dá)，從而促進(jìn)炎癥細(xì)胞在大鼠肺部聚集并釋放炎性介質(zhì)而加重肺損傷； 3.中藥單體白藜蘆醇可能通過(guò)抑制肺栓塞大鼠肺組織p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路降低MCP-1的表達(dá)，從而抑制急性肺栓塞大鼠肺部炎癥細(xì)胞聚集并減少炎性介質(zhì)