新生大鼠高氧性肺損傷肺組織中AQP1、Na+-K+-ATPaseα1、NKCC1的蛋白和mRNA表達及沐舒坦的干預作用.pdf

1、目的：通過建立新生大鼠急性高氧性肺損傷模型及使用沐舒坦干預并與正常新生大鼠對比：
　　1.觀察各組實驗動物的一般情況、肺組織的病理學改變；
　　2.研究各實驗組之間肺組織中水通道蛋白-1（AQP1）、鈉鉀ATP酶α1亞基(Na+-K+-ATPaseα1)、鈉鉀氯共同轉運蛋白-1（NKCC1）的表達變化，以探討AQP1、Na+-K+-ATPaseα1、NKCC1在急性高氧性肺損傷發(fā)病機制中的作用；
　　3.探討沐舒坦對急

2、性高氧性肺損傷是否有保護作用及是否對AQP1、Na+-K+-ATPaseα1、NKCC1的表達有調(diào)節(jié)作用，為臨床防治新生兒高氧性肺損傷提供理論依據(jù)。
　　方法：將120只出生滿48小時的新生SD大鼠（雌雄不限）隨機分為三組：
　　I組：空氣對照組；
　　II組：高氧組（高氧+生理鹽水）；
　　III組：沐舒坦組（高氧+沐舒坦）。
　　I組新生大鼠置于常壓空氣中飼養(yǎng)。II組、III組新生大鼠置于氧濃度維持在9

3、5%以上的氧箱中飼養(yǎng)。III組于實驗第一天起每日早晚腹腔注射沐舒坦(75mg/kg)各一次。Ⅰ組與II組于實驗第一天起每日早晚腹腔注射等量生理鹽水各一次。
　　每組按實驗時間點分為1天、3天、7天三個亞組，每組于各實驗時間點分別隨機取實驗鼠十二只，處死取材檢測以下指標：
　?。?）肺泡灌洗液中總蛋白含量；
　?。?）取左肺稱取其濕、干重，計算肺濕/干重比；
　?。?）肺組織病理學觀察：取右上肺行病理切片后觀察肺組

4、織病理改變；
　?。?）肺組織AQP1，Na+-K+-ATPaseα1，NKCC1蛋白及mRNA含量測定：取部分肺組織勻漿提取蛋白通過western blotting方法分別測定其蛋白含量；另取部分肺組織提取RNA，通過RT-PCR方法分別測定其mRNA含量。
　　結果：
　　1.各組實驗動物一般情況觀察：空氣組中的實驗動物反應好，飲食佳，生長發(fā)育正常，無死亡。高氧組中的實驗動物高氧暴露1天時反應好，膚色紅潤，離氧后無

5、呼吸困難表現(xiàn)出現(xiàn)。高氧暴露三天后實驗動物反應尚可，脫離氧氣后呼吸頻率稍加快。高氧暴露七天時實驗動物精神萎靡，少吃少動，離氧后出現(xiàn)呼吸急促，唇色發(fā)紺，個別死亡。沐舒坦干預組的實驗動物一般情況較高氧組有改善，無實驗動物死亡。
　　2.肺組織病理學改變：空氣組大鼠各時相肺組織未見病理改變，肺泡大小均一、肺泡腔內(nèi)無液體滲出及細胞浸潤。高氧組實驗動物于高氧暴露1天時，肺泡結構完整，肺泡內(nèi)可見少許紅細胞，無明顯滲出；3天后可見血管充血、肺間質(zhì)

6、水腫，肺泡內(nèi)紅細胞、炎癥細胞浸潤；7天時則出現(xiàn)肺組織水腫，結構紊亂，肺泡內(nèi)出血、液體滲出、炎癥細胞浸潤明顯加重。沐舒坦組的肺組織病理改變，肺泡腔內(nèi)液體滲出，紅細胞、炎性細胞浸潤較高氧組明顯減輕。
　　3.肺組織濕/干重比（W/D）：實驗1天時，各組實驗動物的肺組織W/D無明顯差異（P＞0.05）。實驗3天、7天時，高氧組實驗動物的肺組織W/D較空氣對照組有升高，沐舒坦組實驗動物的肺組織W/D較高氧組有降低（P＜0.01）。

7、　　4.支氣管肺泡灌洗液（BLAF）中總蛋白（TP）含量測定：實驗1天時，三組實驗動物BLAF中TP含量差異不明顯，無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。而實驗3天及7天時，高氧組實驗動物的BLAF中TP含量明顯高于空氣對照組(P＜0.01)，而沐舒坦組的BLAF中TP含量則明顯低于高氧組(P＜0.01)。
　　5.肺組織中AQP1，Na+-K+-ATPaseα1，NKCC1蛋白表達水平的變化：
　?。?）各組實驗動物肺組織中的AQ

8、P1的蛋白表達水平在實驗第1天無顯著差異（P＞0.05）。實驗第3天及第7天時，高氧組AQP1的蛋白表達水平較空氣組有明顯下降（P＜0.01）。沐舒坦干預組肺組織中的AQP1的蛋白表達明顯高于高氧組，其差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
　?。?）高氧組的Na+-K+-ATPaseα1的蛋白表達水平在實驗第1天即低于空氣對照組（P＜0.05），且于實驗第3天、7天下降更明顯（P＜0.01）。而沐舒坦組的Na+-K+-ATPaseα

9、1蛋白表達水平在實驗第3天、7天較高氧組有升高（P＜0.05）。
　　（3）三組實驗動物肺組織中的NKCC1的蛋白表達水平在實驗第1天時無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。實驗3天時，高氧組的NKCC1蛋白表達水平較空氣組有降低，而沐舒坦干預組的NKCC1蛋白表達水平則較高氧組有升高（P＜0.05）。實驗第7天時，高氧組中的 NKCC1蛋白表達水平明顯低于空氣對照組，沐舒坦組的NKCC1蛋白表達水平明顯高于高氧組（P＜0.01）。

10、>　　6.肺組織中AQP1，Na+-K+-ATPaseα1，NKCC1的mRNA表達水平的變化：在本實驗中，通過RT-PCR方法檢測顯示：
　?。?）高氧組肺組織中的AQP1的mRNA表達水平在實驗第1天高于空氣組，而在實驗第3天、7天時其AQP1的mRNA表達水平明顯低于空氣對照組（P＜0.01）。沐舒坦干預組的AQP1的mRNA表達水平則于實驗第3天、7天高于高氧組（P＜0.05）。
　?。?）空氣組與高氧組肺組織中的N

11、a+-K+-ATPaseα1和NKCC1的mRNA表達水平在實驗第1天及第3天均無顯著差異（P＞0.05），在實驗第7天，高氧組的肺組織中Na+-K+-ATPaseα1及NKCC1的mRNA表達水平較空氣對照組的相應mRNA表達有升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。而沐舒坦干預后，Na+-K+-ATPaseα1及NKCC1的mRNA表達水平與高氧組比較在各時間點均無明顯差異（P＞0.05）。
　　結論：
　　1．暴露于高

12、濃度氧氣中一定時間可導致新生大鼠發(fā)生急性肺損傷，病理表現(xiàn)為肺組織水腫，肺組織結構紊亂，肺泡內(nèi)出血、炎癥細胞浸潤明顯。
　　2.急性高氧性肺損傷的實驗動物肺組織中的AQP1、Na+-K+-ATPaseα1、NKCC1的蛋白表達水平及AQP1的mRNA的表達水平較正?？諝饨M的肺組織的相應蛋白及mRNA的表達水平明顯下降，且與肺水腫的程度相一致，提示AQP1、Na+-K+-ATPaseα1、NKCC1的蛋白表達水平及AQP1的mRNA的