中華絨螯蟹Na+-K+-ATPaseα1基因的表達(dá)分析與選育良種的中試評(píng)估.pdf

1、中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis），俗稱河蟹，自然分布于我國(guó)東部沿海大部分水域，屬洄游性的水生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物，一生中要經(jīng)歷兩次鹽度變化。因而，中華絨螯蟹需要有合理的調(diào)節(jié)機(jī)制來(lái)維持洄游過(guò)程中體內(nèi)的滲透壓平衡。在另一方面，河蟹作為我國(guó)當(dāng)前養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)價(jià)值最高的淡水蟹類，產(chǎn)業(yè)規(guī)模巨大，而支撐產(chǎn)業(yè)發(fā)展的良種選育工作較為滯后，良種對(duì)河蟹產(chǎn)業(yè)的貢獻(xiàn)率很低。因此，中華絨螯蟹的良種選育勢(shì)在必行。本文針對(duì)中華絨螯蟹的基本生物學(xué)特點(diǎn)和產(chǎn)業(yè)發(fā)展實(shí)際需求

2、，綜合應(yīng)用分子生物學(xué)、養(yǎng)殖生物學(xué)、繁殖生物學(xué)、生物統(tǒng)計(jì)學(xué)等研究方法和實(shí)驗(yàn)手段，研究了中華絨螯蟹Na+/K+-ATPaseα1基因分子結(jié)構(gòu)和表達(dá)特征，分析了中華絨螯蟹選育良種在全國(guó)多個(gè)地區(qū)的中試養(yǎng)殖效果，以及池塘生態(tài)育苗效果。主要結(jié)果如下：
　　1.中華絨螯蟹Na+/K+-ATPaseα1基因的分子克隆與表達(dá)分析
　　Na+/K+-ATPase是水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)滲透壓調(diào)節(jié)的關(guān)鍵酶，由α、β、γ3種亞基組成。本文通過(guò)RT-PCR和R

3、ACE技術(shù)首次從中華絨螯蟹中克隆了Na+/K+-ATPaseα1基因（GenBank登錄號(hào)：KC691291.1）。該基因的全長(zhǎng)cDNA為3805bp，包含306 bp的5’-UTR、3111 bp的開放閱讀框（編碼1037個(gè)氨基酸）和388 bp的3’-UTR。氨基酸序列與其它水生甲殼動(dòng)物的同源性高達(dá)91.9-98.5％，表明其在甲殼動(dòng)物間有高度的保守性。熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測(cè)結(jié)果表明，該基因在肝胰腺中的表達(dá)量最高，鰓中

4、的表達(dá)量次之，腸和胃中的表達(dá)量較為接近，肌肉和心臟中的表達(dá)量最低；該基因在中華絨螯蟹的8個(gè)發(fā)育階段均有表達(dá)，溞狀幼體期（溞I~溞Ⅴ）的表達(dá)量均較低，大眼幼體期的表達(dá)量最高，而后表達(dá)量下降，仔蟹期的表達(dá)量顯著高于幼蟹期(P<0.05)；通過(guò)對(duì)海水(鹽度21)和淡水中飼養(yǎng)30d的成蟹表達(dá)檢測(cè)，海水環(huán)境中該基因在肌肉和肝胰腺的表達(dá)水平顯著高于淡水環(huán)境(P<0.05)，而鰓在淡水環(huán)境中的表達(dá)水平卻顯著高于海水環(huán)境(P<0.05)，海水和淡水環(huán)境

5、中該基因在性腺組織中的表達(dá)水平不存顯著差異(P>0.05)。本研究結(jié)果表明，肝胰腺和鰓是中華絨螯蟹Na+/K+-ATPaseα1基因的主要表達(dá)器官，Na+/K+-ATPaseα1對(duì)中華絨螯蟹滲透壓調(diào)節(jié)起重要作用。本部分研究結(jié)果為生產(chǎn)上蟹苗培育和親體保育的適宜鹽度控制提供了理論依據(jù)。
　　2．中華絨螯蟹選育良種的中試養(yǎng)成效果評(píng)估
　　本部分對(duì)上海正選育的中華絨螯蟹良種在上海、江蘇、安徽和廣西4市省區(qū)的9個(gè)中試地的成蟹養(yǎng)成效果進(jìn)

6、行了評(píng)估。通過(guò)對(duì)成蟹最后一次蛻殼（生殖蛻殼）后的養(yǎng)成性狀（體重、殼長(zhǎng)、殼寬和肥滿度）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：各中試地域的河蟹生長(zhǎng)狀況良好，雄蟹體重規(guī)格在182.90-218.24g，雌蟹在125.39-165.54g，肥滿度為0.53-0.65，大規(guī)格蟹（雌≥150克，雄≥200克）比例為32.1%，體重變異系數(shù)在16.9-24.8；各中試地河蟹的體重與殼長(zhǎng)、殼寬的關(guān)系式均呈現(xiàn)冪函數(shù)關(guān)系；多重方差分析表明：環(huán)境、區(qū)組和性別對(duì)河蟹體重、殼

7、長(zhǎng)、殼寬和肥滿度的差異均極顯著(P＜0.01)；環(huán)境與區(qū)組、環(huán)境與性別對(duì)體重、殼長(zhǎng)、殼寬和肥滿度的交互作用極顯著(P＜0.01)，而區(qū)組與性別對(duì)體重、殼長(zhǎng)、殼寬和肥滿度的交互作用不顯著(P＞0.05)；環(huán)境、區(qū)組與性別三者對(duì)體重、殼長(zhǎng)、殼寬的交互作用極顯著(P＜0.01)，而對(duì)肥滿度的交互作用不顯著(P>0.01)。本部分結(jié)果為中華絨螯蟹選育良種的推廣和應(yīng)用提供了有價(jià)值的參考資料。
　　3.不同規(guī)格親蟹的池塘生態(tài)育苗效果評(píng)估

8、>　　在江蘇射陽(yáng)生態(tài)育苗基地，進(jìn)行了五種不同規(guī)格（A、B、C、D、E）親蟹池塘生態(tài)育苗效果的觀察與比較。親蟹規(guī)格分別是：A：雌100-125g，雄125-150g；B：雌125-140g，雄150-175g；C：雌140-150g，雄175-200g；D：雌150-175g，雄200-225g；E：雌150-175g，雄225-250g。五種規(guī)格親本的畝均出苗量為：A：28.37kg；B：25.05kg；C：22.37kg；D：46.0