免疫組化定位角蛋白、α-SMA、Na+-K+-ATPaseα-β、NKCC1和AQP5在外泌汗腺的表達(dá).pdf

1、目的：
　　人體外泌汗腺由分泌部和導(dǎo)管部組成，它們?cè)谛螒B(tài)和功能上有所區(qū)別，為了更好地了解這兩部分結(jié)構(gòu)，我們使用雙重?zé)晒饷庖呓M織化學(xué)染色的方式，檢測(cè)與汗腺結(jié)構(gòu)和功能相關(guān)的角蛋白和α平滑肌肌動(dòng)蛋白（?-SMA）的具體定位來(lái)區(qū)分兩者，同時(shí)，為了進(jìn)一步研究人體汗腺再生修復(fù)的機(jī)制，我們首先需要定位在汗腺各種生理活動(dòng)中的重要功能蛋白。由于Na+-K+-ATPaseα/β（鈉鉀ATP酶α/β亞單位)，Na+-K+-2Cl-cotransport

2、er1（鈉鉀氯協(xié)運(yùn)體-1）和Aquaporin-5（水通道蛋白-5）在汗腺正常生理功能中發(fā)揮著重要作用，本研究針對(duì)這4個(gè)蛋白也進(jìn)行了定位研究。
　　方法：將獲得的人正常皮膚標(biāo)本進(jìn)行一系列處理，制成石蠟包埋標(biāo)本，進(jìn)行切片，切片厚度為3μm，首先行HE染色，并進(jìn)行以下處理：
　　1、使用雙重?zé)晒饷庖呓M織化學(xué)染色的方式，用配對(duì)方式檢測(cè)以下蛋白：CK8/CK5；CK8/CK14；CK7/CK5；CK7/CK14；α-SMA/CK5；

3、α-SMA/CK14；
　　2、采用過(guò)氧化物酶免疫組織化學(xué)染色（DAB）方法，檢測(cè)以下蛋白：Na+-K+-ATPaseα/β（鈉鉀ATP酶α/β亞單位)，Na+-K+-2Cl-cotransporter1（鈉鉀氯協(xié)運(yùn)體-1）和aquaporin-5（水通道蛋白-5）。分別在熒光顯微鏡和光學(xué)顯微鏡下觀察并拍攝記錄結(jié)果。
　　結(jié)果：
　?。?）雙重?zé)晒饷庖呓M織化學(xué)染色結(jié)果顯示，人體外泌汗腺分泌部CK5＋/CK7＋，CK5＋

4、/α-SMA＋，CK14＋/CK7＋，CK14＋/α-SMA＋；
　?。?）人體外泌汗腺導(dǎo)管部：CK5＋/CK7－，CK5＋/α-SMA—，CK14＋/CK7－，CK14＋/α-SMA－；
　?。?）Na+-K+-ATPaseα主要表達(dá)部位有：上皮基底層和基底層以上的細(xì)胞膜、汗腺分泌部的基底外側(cè)膜、汗腺導(dǎo)管部的外層細(xì)胞和基底外側(cè)膜；
　?。?）Na+–K+-ATPaseβ的表達(dá)部位，除了不在直導(dǎo)管和上皮表達(dá)之外，其他表

5、達(dá)部位跟Na+–K+-ATPaseα一致；
　?。?）NKCC1只在汗腺分泌部的基底外側(cè)膜表達(dá)；
　?。?）AQP5在汗腺分泌部上皮細(xì)胞頂端膜部位強(qiáng)表達(dá)，胞漿弱表達(dá)。
　　結(jié)論：
　?。?）利用CK5/CK7/CK8/CK14和α-SMA等抗原雙重免疫熒光組織化學(xué)染色的方法可以清楚辨別人體外泌汗腺的分泌部和導(dǎo)管部不同結(jié)構(gòu)，有助于進(jìn)一步的研究；
　?。?）Na+-K+-ATPaseα/β（鈉鉀ATP酶α/β亞