信號(hào)通路Sirt1-Nrf2在百草枯中毒小鼠肺損傷中的作用及白藜蘆醇對(duì)其的干預(yù).pdf

1、目的：
　　研究百草枯中毒小鼠在分別給予Sirt1激活劑白藜蘆醇(Resveratrol，Res)及抑制劑尼克酰胺(Nicotinamide，NA)干預(yù)后，肺組織中調(diào)控因子Sirt1的變化及相應(yīng)Nrf2的改變;以及在不同濃度Res干預(yù)下小鼠肺組織調(diào)控因子(Sirt1、Nrf2)、氧化應(yīng)激因子(MDA、SOD、CAT、GSH、HO-1)及血清炎癥因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)動(dòng)態(tài)改變。
　　方法：
　　1.SP

2、F級(jí)健康雄性ICR小鼠174只，體重18-20。(1)隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組（NS組n=6）、Res對(duì)照組(Res組n=6)、NA對(duì)照組(NA組n=6)，PQ組(PQ組n=6)，，PQ+NA組(n=24)，PQ+Res組(n=24);NS組給予等量生理鹽水腹腔注射，Res組給予等量Res腹腔注射，NA組給予等量NA腹腔注射;PQ組給予30mg/kgPQ一次腹腔注射，制作PQ染毒模型;PQ+Res組，在建立PQ染毒模型后，立即給予對(duì)側(cè)腹腔

3、注射60mg/kg Res，PQ+NA組，在建立PQ染毒模型后，立即給予對(duì)側(cè)腹腔注射500mg/kg NA;(2)不同劑量Res干預(yù)PQ中毒小鼠:PQ+Res15mg組(n=12)、PQ+Res30mg組(n=12)、PQ+Res60mg組(n=12);不同劑量Res干預(yù)PQ中毒小鼠，在建立染毒模型后立即對(duì)側(cè)腹腔注射15mg/kg、30mg/kg、60mg/kg Res溶液;PQ組、PQ+Res組及PQ+NA組，分別在6h、24h、72

4、h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死，每組6只。
　　2.觀察小鼠在PQ染毒后的進(jìn)食、活動(dòng)、精神狀態(tài)及死亡情況，在光鏡及電鏡下觀察各組小鼠肺組織的病理變化。
　　3.應(yīng)用RT-PCR法檢測各組小鼠肺組織Sirt1、Nrf2的mRNA表達(dá)水平，應(yīng)用Western blot法測Sirt1、Nrf2的蛋白表達(dá)水平，應(yīng)用化學(xué)比色法檢測肺組織GSH、SOD、MDA、CAT的水平，應(yīng)用ELISA法檢測肺組織IL-6、IL-1β、TNF-α、HO-1的水平，

5、采用TUNEL法觀察小鼠肺組織的細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果：
　　1.NS組、Res組小鼠正常進(jìn)食水，活動(dòng)迅敏，毛色順滑有光澤，體重增加，精神狀態(tài)好;PQ組小鼠均逐漸出現(xiàn)中毒癥狀，進(jìn)食量減少，體重不增，活動(dòng)量減少，鼠毛色澤暗淡、豎立，部分有腹瀉出現(xiàn)，中毒表現(xiàn)以24-72h時(shí)癥狀最重，小鼠死亡多出現(xiàn)在72h左右，7d后小鼠恢復(fù);PQ+Res組小鼠染毒后也有中毒癥狀出現(xiàn)，但較PQ組減輕，隨著Res干預(yù)劑量的增加，中毒癥狀明顯減輕。

6、
　　2.小鼠肺部病理:NS組為正常的肺病理結(jié)構(gòu)表現(xiàn)，PQ組出現(xiàn)肺部損傷表現(xiàn)，PQ+Res組肺部損傷較PQ組減輕。
　　3.TUNEL凋亡結(jié)果:PQ中毒組可見肺泡上皮細(xì)胞凋亡，以72h組最明顯，Res干預(yù)組與PQ組比較肺泡上皮細(xì)胞凋亡明顯減少。
　　4.與NS組相比較，PQ組肺組織Sirt1、Nrf2 mRNA及蛋白的表達(dá)水平以及血清HO-1活力在6h及24h時(shí)均升高，72h組降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）;IL-

7、6、IL-1β、TNF-α、GSH含量、SOD、CAT活力均明顯增高，MDA活力明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）;與PQ組比較，PQ+Res組肺組織Sirt1、Nrf2 mRNA、蛋白的表達(dá)水平，IL-6、IL-1β、TNF-α、GSH含量、SOD、CAT活力均明顯降低，MDA活力明顯增高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）;PQ+NA干預(yù)組肺組織Sirt1、Nrf2mRNA、蛋白的表達(dá)水平均明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。