白介素-17A在急性百草枯中毒致肺損傷中的作用.pdf

1、目的:白介素-17A（Interleukin-17A，IL-17A）是一種具有強(qiáng)效促炎作用的細(xì)胞因子，參與包括獲得性和自身免疫性在內(nèi)的多種炎癥反應(yīng)性疾病。最近的研究表明，IL-17A在膿毒癥(Sepsis)和博來霉素(Bleomycin，BLM)導(dǎo)致的急性肺損傷(Acute Lung Injury，ALI)中具有重要作用，而在急性PQ中毒致肺損傷中的作用如何尚無報道。本研究旨在探究IL-17A在百草枯(Paraquat，PQ)中毒致AL

2、I中的作用及其可能途徑。
　　研究方法:將180只雌性小鼠隨機(jī)平均分為9組:生理鹽水對照組(NS)，PQ中毒組（PQ，4組），抗體組（PQ+Ab，4組）。PQ和PQ+Ab組采用一次性灌胃25mg·kg-1 PQ溶液建立PQ中毒小鼠模型，PQ+Ab組小鼠灌胃PQ溶液2h后經(jīng)腹腔一次性注射5mg·kg-1 IL-17A中和性抗體，PQ組給予等量體積的生理鹽水，NS組分別給予等量體積的生理鹽水。PQ組與PQ+Ab組分別于染毒8h、24h

3、、48h、72h時各取存活小鼠處死，NS組于24h時處死，分別留取外周血清、支氣管-肺泡灌洗液(Broncho-alveolar Lavage Fluid，BALF)和肺組織標(biāo)本。蘇木精-伊紅染色(Hematoxylin-eosin，HE)染色法觀察各組小鼠肺病理學(xué)改變并評分，測定小鼠肺組織濕干比重(W/D)，用Bradford法測定BALF總蛋白含量以評定肺組織的損傷;酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-linked Immuno Sorb

4、ent Assay，ELISA)測定BALF中IL-17A以及血清中IL-17A、IL-6、腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α)的水平變化，自動血球分析儀檢測BALF白細(xì)胞總數(shù)與中性粒細(xì)胞百分比，免疫組化染色(Immunohistochemical，IHC)法檢測IL-17A在肺組織中的表達(dá)水平及肺組織中核轉(zhuǎn)錄因子-κ B p65(Nuclear Factor-κ B p65，NF-κB p65

5、)核轉(zhuǎn)位，q-PCR法檢測IL-17A mRNA在肺組織中的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:NS組無小鼠死亡，染毒后，PQ組和PQ+Ab組小鼠72h內(nèi)分別累計死亡18只和13只;與NS組比較，PQ與PQ+Ab組小鼠肺W/D明顯升高（P＜0.001），肺HE染色光學(xué)顯微鏡下呈現(xiàn)ALI的病理性改變，血清IL-17A、IL-6、TNF-α水平顯著升高(P＜0.05)，BALF中IL-17A水平升高、總蛋白含量增多、白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞百分比均明

6、顯升高（P＜0.05）;同時，肺組織中IL-17A mRNA的表達(dá)水平升高（P＜0.05），IHC檢測顯示IL-17A在肺組織中呈陽性表達(dá)并且NF-κBp65在肺組織中呈核轉(zhuǎn)位陽性。與PQ組比較，PQ+Ab組小鼠，肺W/D明顯降低（P＜0.001)、肺組織病理損傷減輕（P＜0.05），血清中IL-17A、IL-6、TNF-α水平較PQ組明顯降低（P＜0.05），BALF中的IL-17A水平顯著降低（P＜0.001）、總蛋白含量減少（P＜

7、0.05）、白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞的百分比明顯減少(P＜0.05)，同時，NF-κB p65的IHC評分明顯降低（P＜0.001），IL-17A mRNA的表達(dá)與IL-17AIHC評分在24h、48h、72h時明顯降低（P＜0.05）。
　　結(jié)論: IL-17A參與并促進(jìn)急性PQ中毒引起的肺損傷，該作用可能是通過募集中性粒細(xì)胞直接損傷肺組織以及活化NF-κ B p65并放大炎癥的級聯(lián)反應(yīng)實(shí)現(xiàn)的;抗體阻斷IL-17A能夠明顯減輕PQ