急性百草枯中毒肺損傷小鼠模型建立及補體在其發(fā)病中的作用研究.pdf

1、實驗?zāi)康模和ㄟ^建立急性百草枯(parapuat，PQ)中毒肺損傷小鼠模型，初步研究補體系統(tǒng)在急性百草枯中毒肺損傷中的作用。 方法： (1)實驗一：以不同劑量PQ(10mg/kg、20mg/kg和50mg/kg)染毒BALB/c小鼠，48小時后采集小鼠肺泡灌洗液(BALF)、肺組織標(biāo)本，以Bradford法測BALF中總蛋白濃度，測定肺組織髓過氧化物酶(MPO)活性以及肺組織病理學(xué)分析，研究不同劑量急性百草枯中毒小鼠肺損傷

2、情況； (2)實驗二：采用20mg/kgPQ染毒小鼠，于染毒后0h、4h、12h、24h、48h留取肺泡灌洗液、肺組織標(biāo)本，同樣觀察上述指標(biāo)，研究百草枯中毒小鼠不同時間點急性肺損傷特點；同時收集小鼠血清，采用免疫比濁法檢測血清C3c水平，免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測肺組織中C3、C5a和C1q沉積和分布，研究染毒后小鼠體內(nèi)補體激活情況以及與肺組織損傷之間的相互關(guān)系； (3)實驗三：選用PQ染毒劑量10mg/kg、20mg/kg，

3、分別在染毒前48h、36h、24h腹腔內(nèi)注射眼鏡蛇毒因子(CVF)2.5 μg耗竭小鼠體內(nèi)補體，染毒后48h留取肺泡灌洗液、肺組織，與未注射CVF以相同劑量PQ染毒小鼠比較BALF總蛋白濃度、MPO活性、組織病理學(xué)以及存活率差異，進(jìn)一步研究補體在百草枯中毒小鼠急性肺損傷中的作用。 結(jié)果： (1)小鼠肺組織MPO活性、BALF總蛋白濃度及肺組織病理學(xué)比較結(jié)果提示隨PQ染毒劑量加大和病程的延長，肺組織損傷逐漸加重；

4、(2)本研究顯示20mg/kgPQ染毒小鼠血清C3c水平在染毒后12h升高，24h達(dá)到高峰，持續(xù)至48h；免疫組化顯示染毒后4h C3在肺血管內(nèi)皮、細(xì)支氣管上皮及間質(zhì)均有沉積，著色重，12小時開始小鼠肺組織C3沉積減少，著色變淡；C5a、C1q自染毒后4h開始在肺血管內(nèi)皮、細(xì)支氣管上皮基底膜及間質(zhì)均有沉積，且隨病程延長，著色逐漸加重； (3)CVF耗竭補體后染毒小鼠肺組織損傷減輕，炎性細(xì)胞浸潤減少，存活時間延長。10mg/kg單