紅霉素干預(yù)百草枯急性中毒性肺損傷機(jī)理的初步研究.pdf

1、背景和目的：嚴(yán)重的百草枯中毒特點(diǎn)是多器官功能衰竭，肺是主要的靶器官，且肺損傷也是主要死亡原因之一。目前百草枯中毒尚無特效治療藥物，死亡率較高。細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)參與細(xì)胞間的相互作用，可能是調(diào)節(jié)嗜中性粒細(xì)胞(PMN)參與肺損傷發(fā)展的重要分子基礎(chǔ)。另據(jù)研究紅霉素(14環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素)除了抗菌活性外，還具有潛在的免疫調(diào)節(jié)活性，可能通過直接或間接干預(yù)PMN的活性功能而改善肺部慢性炎癥的發(fā)生發(fā)展。然而尚無有關(guān)紅霉素干預(yù)百草枯中

2、毒性肺損傷的相關(guān)研究。因此，本研究探討紅霉素對(duì)急性百草枯中毒性肺損傷的干預(yù)作用以及可能干預(yù)機(jī)制，以期為防治百草枯中毒所致急性肺損傷提供理論依據(jù)。． 方法：①紅霉素干預(yù)百草枯急性中毒性肺損傷的研究：將18只SPF級(jí)SD雄性大鼠隨機(jī)分為百草枯中毒組(PQ組)、紅霉素干預(yù)組(EM組)、正常對(duì)照組(N)。一次性腹腔注射百草枯溶液(20mg/Kg)或等量無菌生理鹽水制備急性百草枯中毒模型和正常對(duì)照組：另外按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)預(yù)先3天給大鼠灌胃紅霉素

3、(50mg／kg)給予干預(yù)治療，并于急性百草枯中毒造模的第2天處死各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，觀察各組大鼠肺組織ICAM-1表達(dá)、髓過氧化物酶(MPO)活性水平、光鏡下肺組織病理改變及肺損傷評(píng)分。②從細(xì)胞水平觀察紅霉素干預(yù)百草枯中毒性肺損傷的可能機(jī)理：首先采用MTT法于不同時(shí)間點(diǎn)上檢測(cè)不同濃度PQ、EM對(duì)肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的毒性作用；然后，將體外培養(yǎng)的鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞隨機(jī)分為空白對(duì)照組(培養(yǎng)基組)、PQ組(0.05mM)、EM干預(yù)組(0.05mM P

4、O+5μg／mlEM)，每組設(shè)6復(fù)孔，分別孵育24小時(shí)，用免疫細(xì)胞親和化學(xué)的方法測(cè)定各組肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞膜表面ICAM-1的表達(dá)。結(jié)果：①紅霉素干預(yù)百草枯急性中毒所致肺損傷的研究：PQ組大鼠的肺組織鏡下可見明顯的肺損傷，表現(xiàn)為肺充血水腫、出血、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)以及肺泡間隔增厚等，EM干預(yù)組上述病理變化減輕，肺損傷程度評(píng)分也明顯低于PQ組(P<0.01)；組間比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。另外，PQ組肺組織ICAM-1的表達(dá)增強(qiáng)、肺組

5、織勻漿內(nèi)MPO的活性水平較高，EM干預(yù)組ICAM-1的表達(dá)明顯減弱、MPO的活性也明顯降低；組間比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。②從細(xì)胞水平觀察紅霉素干預(yù)百草枯中毒性肺損傷的機(jī)理：MTT法檢測(cè)顯示PQ對(duì)肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞具有直接的細(xì)胞毒性作用；而EM對(duì)肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞無細(xì)胞毒性作用，且不影響其生長(zhǎng)代謝。免疫親和細(xì)胞化學(xué)法見PQ組肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞膜表面ICAM-1陽性表達(dá)較強(qiáng)，膜之間表達(dá)牽連成網(wǎng)格狀，與對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0

6、.01)：EM干預(yù)組肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞膜表面陽性表達(dá)明顯減弱，與PQ組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。 結(jié)論：百草枯中毒組大鼠肺組織ICAM-1表達(dá)明顯上調(diào)、MPO活性水平升高、肺損傷程度較重，并且ICAM-l的表達(dá)與MPO活性水平呈正相關(guān)。此外，百草枯對(duì)肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞具有直接的細(xì)胞毒性作用，并且可誘發(fā)其膜表面表達(dá)ICAM-l；紅霉素可能通過削弱肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞膜表面ICAM-l的表達(dá)，來抑制PMN的聚集、活化，而改善百草