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1、目的:采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)的技術(shù)檢測(cè)microRNA-21(miRNA-21)在腎細(xì)胞癌與癌旁腎組織中的表達(dá)水平的差異,并結(jié)合其與臨床的相關(guān)性,分析其表達(dá)水平間的差異及其臨床意義,從而為進(jìn)一步研究microRNA-21在腎細(xì)胞癌的作用機(jī)制做準(zhǔn)備。
方法:收集2015年08月-2016年01月在鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院(河南省腫瘤醫(yī)院)就診的經(jīng)手術(shù)后病理確診為腎細(xì)胞癌的組織標(biāo)本39例,同時(shí)取相對(duì)應(yīng)的腎細(xì)胞癌旁腎組織
2、(距離腫瘤邊緣>2cm)做為對(duì)照。腫瘤分期采用2010年美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)(AJCC)第七版TNM分期標(biāo)準(zhǔn):Ⅰ期和Ⅱ期18例,Ⅲ期和Ⅳ期21例。其中患者的年齡26-85歲,平均年齡57.1±10.56歲,其中腎透明細(xì)胞癌28例,其他類型腎細(xì)胞癌11例,男性為24例,女性為15例。所有患者術(shù)前均沒有進(jìn)行任何的治療。分別對(duì)39對(duì)腎細(xì)胞癌及癌旁腎組織進(jìn)行microRNA的提取,然后將提取的microRNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,再應(yīng)用RT-PCR方
3、法進(jìn)一步驗(yàn)證microRNA,RT-PCR后再采用瓊脂糖凝膠電泳初步檢測(cè)所得到的PCR產(chǎn)物,證明相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)條件和所設(shè)計(jì)的引物均符合實(shí)驗(yàn)要求,然后再采用RT-PCR方法檢測(cè)microRNA-21在腎細(xì)胞癌組織和相應(yīng)癌旁腎組織中的表達(dá)情況。最后對(duì)microRNA-21與腎細(xì)胞癌患者的臨床及病理特征之間的相關(guān)性進(jìn)行分析,探討其表達(dá)水平間的差異及其臨床意義。本實(shí)驗(yàn)采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。P<0.05時(shí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義。
4、> 結(jié)果:電泳結(jié)果顯示,microRNA-21呈單一的條帶,其所處的位置及其在癌旁腎組織和腎細(xì)胞癌組織中的表達(dá)情況均符合實(shí)驗(yàn)前期的預(yù)計(jì)。Real-time PCR檢測(cè)39例腎細(xì)胞癌原發(fā)灶、癌旁腎組織中均有microRNA-21的表達(dá),癌組織相對(duì)于癌旁腎組織是高表達(dá)的,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;腎透明細(xì)胞癌(28例)癌組織相對(duì)于癌旁腎組織表達(dá)也是升高的,其差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。28例腎透明細(xì)胞癌標(biāo)本中有21例標(biāo)本microRNA-21的表達(dá)明顯高
5、于其在癌旁腎組織中的表達(dá),僅有7例腎細(xì)胞癌標(biāo)本中microRNA-21的表達(dá)低于其在癌旁腎組織中的表達(dá)。microRNA-21表達(dá)的升高與腫瘤的病理類型:腎透明細(xì)胞癌與其他類型腎細(xì)胞癌有關(guān)聯(lián),而且透明細(xì)胞癌組與嫌色癌組之間、透明細(xì)胞癌組與未分類腎細(xì)胞癌組之間microRNA-21的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但是,microRNA-21的表達(dá)與患者的臨床分期、年齡、性別、腫瘤位置及腫瘤大小、吸煙史、飲酒史無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)論:m
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