基于HCN離子通道的長效局麻藥的設(shè)計、合成和評價.pdf

1、以臨床用HCN離子通道非選擇性抑制劑伊伐布雷定及其同系物西洛雷定、MEL57A、伊伐布雷定、扎替雷定和EC18為研究對象，提取出可能的藥效基團七元氮雜環(huán)，以局麻藥利多卡因和布比卡因結(jié)構(gòu)單元替代其中的苯胺結(jié)構(gòu)片段，以期構(gòu)建即保留HCN離子通道抑制效果，又保留局部麻醉藥的麻醉作用的化合物。同時為了兼顧MEL57A分子中連接片斷雙鍵結(jié)構(gòu)所展示出來的選擇性，本論文亦分別采用了丁烷和順-2-丁烯為連接部分，共設(shè)計合成了4個目標化合物。本論文同時合

2、成了羅哌卡因的一對對映異構(gòu)體和羅哌卡因外消旋體，并通過手性色譜鑒定其光學(xué)純度，以用于研究羅哌卡因的一對對映異構(gòu)體對HCN離子通道選擇性差異。
　　在異氟烷氣體麻醉條件下，對小鼠腘窩注射目標化合物1（37mM），化合物2（37mM），化合物3（15mM），進行坐骨神經(jīng)麻醉，記錄針刺疼痛抑制持續(xù)時間，以研究目標化合物局部麻醉作用效果。結(jié)果顯示化合物1的局部麻醉持續(xù)時間為39.4（34.6~44.1）min，化合物2的局部麻醉持續(xù)時間為

3、47.3（39.0~55.5）min，化合物3的局部麻醉持續(xù)時間為23.5（3.6~43.4）min，利多卡因在相同給藥摩爾濃度下，局部麻醉持續(xù)時間為6.7（4.0~9.5）min。
　　通過質(zhì)粒pcDNA3.0-HCN1、pcDNA3.0-HCN2和pcDNA3.0-GFP轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，以小量質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒，微量分光光度計測定濃度，以雙酶切鑒定質(zhì)粒。采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法，將確認的pcDNA3.0-HCN1和pcDNA

4、3.0-GFP質(zhì)粒、pcDNA3.0-HCN2和pcDNA3.0-GFP質(zhì)粒分別共轉(zhuǎn)染進入HEK293細胞中，構(gòu)建HCN1型及HCN2型離子通道的真核細胞表達模型。通過膜片鉗記錄電流，驗證離子通道的活性。
　　本文以單分子、雙靶點的藥物設(shè)計思路，將HCN離子通道抑制劑的活性結(jié)構(gòu)片段和局麻藥分子通過碳鏈連接起來，設(shè)計合成4個目標化合物，整體動物的初步活性實驗顯示化合物1-3具有較好的局麻效果。本文亦建立HCN離子通道的體外細胞模型，