芒果苷的腸吸收與P糖蛋白和多藥耐藥相關(guān)蛋白2的關(guān)系.pdf

1、目的
　　1.利用血藥濃度法，考察芒果苷的吸收與P糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)和多藥耐藥相關(guān)蛋白2(Multidrug resistance associated protein2，MRP2)的關(guān)系。
　　2.采用大鼠在體單向腸灌流的實(shí)驗(yàn)動物模型，探討芒果苷的腸吸收與P-gp和MRP2的相互關(guān)系。
　　3.應(yīng)用MDCK-MDR1細(xì)胞單層模型研究P-gp抑制劑對芒果苷吸收的影響。
　　方法

2、>　　1.樣品的測定:采用已建立的LC-MS/MS方法對血漿和T.M.溶液中的芒果苷進(jìn)行含量測定，利用超高效液相色譜法(UPLC-UV)和紫外分光光度法分別檢測灌流液中的芒果苷和酚紅濃度。
　　2.P-gp和MRP2抑制劑對芒果苷在大鼠體內(nèi)藥動學(xué)影響的研究:SD大鼠隨機(jī)分組，每組6只，予以芒果苷單體、芒果苷單體分別聯(lián)合鹽酸維拉帕米、環(huán)孢霉素和吲哚美辛灌胃給藥后，定時采血，分離血漿，測定血漿中芒果苷的濃度，用DAS軟件計算藥代動力學(xué)

3、參數(shù)，并對芒果苷主要的藥動學(xué)參數(shù)Cmax和AUC進(jìn)行統(tǒng)計，比較組間的差異。
　　3.芒果苷在體腸吸收的研究:應(yīng)用單向在體腸灌流實(shí)驗(yàn)動物模型，分別灌流芒果苷單體、芒果苷單體聯(lián)合鹽酸維拉帕米、環(huán)孢霉素或吲哚美辛，測定灌流液中芒果苷和酚紅的濃度，根據(jù)校正值計算出芒果苷的表觀滲透系數(shù)(Peff)和吸收常數(shù)(Ka)，研究P-gp和MRP2抑制劑對芒果苷腸吸收的影響。
　　4.芒果苷在MDC-MDR1細(xì)胞中的研究:應(yīng)用MDCK-MDR1

4、細(xì)胞單層模型，在相同轉(zhuǎn)運(yùn)條件和相同的芒果苷劑量下，計算出的芒果苷在AP→BL方向和BL→AP方向的Papp值，考察P-gp抑制劑對芒果苷吸收的影響。
　　結(jié)果
　　1.P-gp抑制劑對芒果苷的影響
　　(1)大鼠灌胃給予芒果苷單體聯(lián)合P-gp抑制劑（鹽酸維拉帕米和環(huán)孢霉素）后，與芒果苷單體組相比，其血藥濃度顯著升高，達(dá)峰時間后延，藥動學(xué)參數(shù)表明芒果苷單體聯(lián)合P-gp的抑制劑后，其在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)行為有顯著差異，經(jīng)軟件

5、對所得的主要藥動學(xué)參數(shù)進(jìn)行分析，其CMAX和AUC經(jīng)劑量校正后方差分析(ANNOVE)的結(jié)果證實(shí)，聯(lián)合鹽酸維拉帕米和環(huán)孢霉素后，芒果苷的主要藥動學(xué)參數(shù)CMAX和AUC0→∞與單體組比具有統(tǒng)計學(xué)差異，推測芒果苷為P-gp的底物。
　　(2)在灌流液中加入了P-gp抑制劑鹽酸維拉帕米后，芒果苷的吸收參數(shù)Ka和Peff的值均有不同程度的增加。對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了單因素方差分析（含LSD），發(fā)現(xiàn)在空腸段和回腸段，維拉帕米能顯著地增加芒果苷吸收

6、的Ka值和Peff值。加入另一種P-gp抑制劑環(huán)孢霉素后，在空腸段，芒果苷的Peff值和Ka值雖有不同程度的升高，但無統(tǒng)計學(xué)意義;在回腸段，芒果苷的吸收明顯增加，比聯(lián)合鹽酸維拉帕米組作用更明顯，推測芒果苷為P-gp的底物。
　　(3)在供試液中加入P-gp抑制劑鹽酸維拉帕米或環(huán)孢霉素A后，芒果苷的AP→BL方向的Papp均顯著性的增加且有統(tǒng)計學(xué)意義，外排率(ER)均有不同程度的下降，表明加入了P糖蛋白的抑制劑會顯著的影響芒果苷在體

7、內(nèi)的腸吸收。
　　2.MRP2抑制劑對芒果苷的影響
　　(1)給大鼠單次灌胃芒果苷單體聯(lián)合MRP2的抑制劑吲哚美辛后，芒果苷的血藥濃度有明顯增加，芒果苷的達(dá)峰時間明顯后延，大鼠體內(nèi)的最大血藥濃度CMAX，AUC0→T，AUC0→∞與芒果苷單體組相比有一定的增加，但無統(tǒng)計學(xué)意義，芒果苷的達(dá)峰時間TMAX從原來的0.55h增加到1.95h，經(jīng)統(tǒng)計有顯著的意義，表明加入MRP2抑制劑有利于芒果苷在體內(nèi)的吸收。
　　(2)在體

8、單向腸灌流實(shí)驗(yàn)中，在空腸段加入MRP2抑制劑吲哚美辛后，與芒果苷單體組比較，芒果苷的Ka和Peff值有增加，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示吲哚美辛對芒果苷的空腸吸收無顯著影響。在回腸段加入了吲哚美辛后，芒果苷的吸收參數(shù)(Ka值和Peff值)均顯著增加(P＜0.05)，這提示芒果苷是MRP2的底物，加入吲哚美辛后會增加芒果苷的腸吸收。
　　結(jié)論
　　本文應(yīng)用了血藥濃度法、在體單向腸灌流模型和MDCK-MDR1細(xì)胞單層模型研究芒果苷的