血腦屏障上的P-糖蛋白，多藥耐藥蛋白2和乳腺癌耐藥相關蛋白對奎硫平的作用.pdf

1、一、目的： 建立同時測定大鼠腦脊液、腦組織及血漿中奎硫平及其活性代謝物7-羥基奎硫平，7-羥基N-烷基奎硫平的方法；在體內(nèi)研究奎硫平及其活性代謝物是否是血腦屏障上的轉(zhuǎn)運蛋白P-糖蛋白(P-gp)，多藥耐藥蛋白2(MRP2)、乳腺癌耐藥相關蛋白(BCRP)的底物；并初步探討血管-腦脊液屏障上轉(zhuǎn)運蛋白P-gp的編碼基因mdrla表達水平的個體差異對奎硫平進入中樞的影響。 二、方法： 1.給藥及采樣1.1選用清潔級健康

2、成年雄性SD大鼠160只按體重進行隨機區(qū)組設計，分為四組。分別腹腔注射生理鹽水、維拉帕米(1 mg·kg-1)、丙磺舒(100 mg·kg-1)和泮托拉唑(18.8 mg·kg-1)，15分鐘后灌服奎硫平(3.6 mg·kg-1)，于0，0.5，1，1.5，2，4，6和8 h各處死5只斷頭取血，同時在冰臺上快速取腦組織。 1.2選用清潔級健康成年雄性SD大鼠40只按體重進行完全隨機設計，分為兩組。分別腹腔注射生理鹽水和維拉帕米(

3、1 mg·kg-1)，15分鐘后灌服奎硫平(3.6 mg·kg-1)，于0，0.5，1，1.5，2，3，4，6和8 h尾靜脈取血，同時經(jīng)枕骨大孔采集腦脊液。采集完成后，快速在冰臺上取出腦組織，置于液氮中保存。 2.生物樣品測定方法2.1采用UPLC-MS/MS測定全血、腦脊液及1.1中取出的腦組織中奎硫平及其兩種活性代謝物的濃度。 2.2采用RT-PCR測1.2腦組織中mdrla表達水平。 三、結果： 1

4、.生物樣本中藥物濃度的測定結果用UPLC-MS/MS法測定奎硫平及其兩種活性代謝物的濃度。在血漿中，QP,QP-OH，QP-ND分別在0.08～155 ng·mL-1、0.05～98 ng·mL-1和0.07～670 ng·mL-1濃度范圍內(nèi)線性良好。在腦脊液中QP,QP-ORQP-ND分別在0.02～38.8ng·mL-1、0.01～29.5 ng·mL-1和0.01～134ng·mL-1濃度范圍內(nèi)線性良好。在腦組織勻漿液中QP,QP

5、-OH,QP-ND分別在0.02～38.8 ng·mL-1、0.01～29.5 ng·mL-1和0.01～134 ng-mL-1濃度范圍內(nèi)線性良好。方法回收率均在87％～105％范圍內(nèi)，日間和日內(nèi)精密度均<16％。 2.大鼠灌服奎硫平腦/血漿藥物濃度比的AUC0-8hQP,第I組為22.14±4.18 ng·h·mL-1；第II組為28.49±3.7 ng·h·mL-1；第III組為24.95±3.5 ng·h·mL-1；第IV

6、組為48.76±5.8 ng·h·mL-1，僅有第II、IV組與第I組相比，其差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 QP-OH:第I組為4.62±1.46 ng·h·mL-1；第II組為5.84±2.48 ng·h·mL-1；第III組為8.04±1.83 ng·h·mL-1；第IV組為15.49±2.84 ng·h·mL-1。僅有第IV組與第I組相比，其差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 QP-ND:第I組為3.26

7、±1.90 ng·h·mL-1；第II組為1.69±81 ng·h·mL-1；第III組為8.92±1.54 ng·h·mL-1；第IV組為4.04±1.35 ng·h·mL-1。第III組與第1組相比，其差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。 3.腦脊液/血漿藥物濃度-mdrla表達水平的關系3.1腦脊液/血漿QP藥物濃度比的AUC0-8h： 第I組為22.23±1.74 ng·h·mL-1；第II組為25.95±1.40 ng

8、-h·mL-1。兩者差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 3.2腦脊液/血漿QP藥物濃度比值隨著mdrla表達水平的增加而降低，兩者的擬合回歸曲線為Y=161.26e-1.65X，相關系數(shù)r=-0.940。 四、結論： 1.在體內(nèi)，QP通過P-gp，BCRP轉(zhuǎn)運，QP-OH可通過BCRP轉(zhuǎn)運，QP-ND能通過MRP2轉(zhuǎn)運。 2.隨著血管.腦脊液屏障上mdrla的表達水平的增加，奎硫平進入中樞的程度呈指數(shù)降低